破伤风梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒采用特异性荧光PCR技术，精准检测破伤风梭状芽孢杆菌核酸，适配外伤创面分泌物、土壤、畜禽组织样本。破伤风梭菌为厌氧致病菌，外伤感染后易引发强直性痉挛、中毒性病症，致死风险极高，传统检测难以实现早期预判。本试剂盒灵敏度高、检测快速，可精准检出微量病原核酸，实现感染早期筛查与确诊，特异性强，无其他梭菌交叉干扰，适用于临床外伤感染排查、畜禽外伤疫病防控、环境病原监测等场景。

基础原理：

伤口病灶组织核酸提取，破伤风梭菌破伤风毒素基因特异性引物 PCR，电泳条带判定致病菌。

荧光定量 TaqMan PCR，探针靶向毒素编码基因，微量病灶样本即可检出低载量梭菌核酸。

伤口杂质中和 PCR 体系，试剂盒缓冲液清除组织胶原蛋白抑制物，保证靶基因稳定扩增。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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