磷酸化组蛋白H2AX抗体 新品

产品属性

商品介绍

产品应用:

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:phospho-Histone H2A.X(Ser140); H2AX_HUMAN; 2A.X variant histone; H2A.X; H2A/X; H2AFX; Histone H2AX;

交叉反应:Human,Mouse,Rat

抗体来源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human Histone H2AX around the phosphorylation site of Tyr139

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Polyclonal

理论分子量：16 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

原理特点

该抗体特异性识别磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX），H2AX磷酸化是DNA双链断裂的标志性修饰，可启动DNA损伤修复、细胞周期阻滞与凋亡信号。该抗体可精准检测细胞DNA损伤程度，定位损伤位点；同时可封闭磷酸化修饰位点，干扰DNA损伤修复信号传导，抑制细胞损伤修复能力，助力研究基因组损伤、肿瘤放化疗敏感性、细胞衰老机制。

靶点背景

靶点背景：DNA 双链断裂（DSB）时，H2AX 快速在 Ser139 位点磷酸化生成 γ-H2AX，是 DNA 损伤最经典标志物，辐射、化疗药、氧化损伤均可诱导。

作用机制：抗体专一结合 Ser139 磷酸化表位，无未磷酸化 H2AX 交叉反应，可标记 DNA 损伤灶点。

产品特点：IF 可见清晰损伤灶荧光斑点，灵敏度极高；广泛用于放化疗药效、基因毒性检测、衰老、肿瘤 DNA 修复缺陷研究。

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核心实验操作方法

1. Western Blot（WB）

抗体孵育

一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。

洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。

显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。

2. 免疫组化（IHC）

抗体孵育

一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。

二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。

显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。

3. 免疫荧光（IF）

抗体孵育

一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。

二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。

观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。

4. ELISA实验

包被与孵育

包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。

封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。

检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。