甲型流感病毒M1亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术，针对甲型流感病毒M1亚型的保守基因区域（如基质蛋白M1基因）设计特异性引物和荧光染料（如SYBR Green）。通过逆转录将病毒RNA转化为cDNA，随后进行PCR扩增，实时监测荧光信号变化，实现对病毒核酸的定性或定量检测。

试剂组成

反应液：含缓冲液、dNTPs、逆转录酶等，支持RNA逆转录和PCR扩增（500μL/管，25T规格为1管，50T规格为2管）。

酶液：含高保真DNA聚合酶（25μL/管，25T规格；50μL/管，50T规格）。

阳性质控品：含M1亚型靶序列的RNA（250μL/管）。

阴性质控品：无核酸酶水（250μL/管）。

注：不同批号组分不可混用。

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议不超过5次），有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

LightCycler系列

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf RealPlex

检测流程

样本采集：鼻咽拭子、咽拭子或呼吸道分泌物，需低温保存或立即处理。

RNA提取：推荐使用磁珠法或离心柱法提取病毒RNA。

逆转录与扩增：

将RNA模板与反应液、酶液混合，按以下程序运行：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40个循环，荧光采集）。

结果分析：根据扩增曲线和Ct值判定样本阳性/阴性，定量需使用标准品绘制标准曲线。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒RNA。

特异性：不与甲型流感其他亚型（如N6）或常见呼吸道病原体交叉反应。

线性范围：定量检测覆盖10^1~10^6拷贝/μL。

注意事项

实验需在PCR洁净环境下操作，避免气溶胶污染。

阴阳性质控品需与样本同步检测，以监控试剂有效性。

本产品仅限科研使用，临床诊断需经进一步验证。

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