植物内源基因18SrDNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

 产品介绍：

该试剂盒主要用于检测样本中是否存在植物源性成分，通过扩增植物中保守的18S核糖体RNA基因（18S rRNA）来实现。它通常作为内参基因使用，用于验证DNA提取是否成功、PCR反应体系中是否存在抑制物，或用于确认样本中是否含有植物成分（如食品掺假检测、饲料分析等）。

�� 检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对植物界高度保守的18S rRNA基因序列设计特异性引物和TaqMan探针。探针上连接有荧光报告基团（如FAM）和荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会切断与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，从而实现对植物18S rDNA的特异性检测。

内参作用：如果18S rDNA检测为阴性，说明DNA提取失败或样本中不含植物基因组，此时即使目标基因（如转基因成分）检测为阴性，也不能判定为“非转基因”，必须以内参结果为准。

主要优势：

广谱性：引物设计针对植物保守序列，能检测绝大多数高等植物的DNA。

高特异性：探针结合确保了检测结果的准确性，不易受非植物DNA干扰。

高灵敏度：检出限通常可达1×10³ 拷贝/毫升，能够检测出极低含量的植物成分。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

反应体系  20-25 μL

适用仪器  ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480等实时荧光定量PCR仪

适用样本  农作物植株、种子、加工食品（如米粉、面粉、豆制品）、植物蛋白饮料、饲料等。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T或48T规格为例）：

qPCR Mix：包含反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等。

引物探针混合液：预混了针对植物18S rDNA的特异性引物和TaqMan探针。

阳性对照 (PC)：含有植物18S rDNA片段的质粒或标准DNA。

阴性对照 (NC)：无模板对照（NTC）。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融，使用前需完全解冻并混匀。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的植物组织、食品或饲料样本。

使用CTAB法或商品化的DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为20-25 μL）：

qPCR Mix: 10-12.5 μL

引物探针混合液: 1-2 μL

模板DNA: 2 μL

无菌水: 补足至体系总体积

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM）、反应程序并运行。

结果判读

阳性：Ct值 < 38，且扩增曲线有明显的指数增长期。说明样本中含有植物源性成分或DNA提取成功。

阴性：Ct值 ≥ 40 或无Ct值。说明样本中可能不含植物成分或DNA提取失败。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。使用一次性吸头和专用工作服。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

公司正在出售的产品：

应用场景与产品选择建议

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）