植物内源基因18SrDNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

植物内源基因18SrDNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

核心概述与检测意义：

检测目标：植物18S核糖体DNA。这是一个在所有真核生物细胞中都非常保守的基因，负责核糖体的组成。在植物中，它稳定、大量地存在。

核心价值与用途：

DNA提取质量的内参对照：

在任何植物样本的分子检测中（如转基因检测、物种鉴定、病原体检测），首先需要确保从样本中成功提取出了高质量且足量的植物DNA。

如何工作：在运行目标检测（如检测转基因元件CaMV 35S）的同一反应管中，同时运行18SrDNA的检测。 * 结果解读：如果18SrDNA检测结果为阳性（有明显的荧光信号），说明DNA提取成功，样本中确实含有植物源性成分，且质量足以进行PCR扩增。如果18SrDNA为阴性，则表明DNA提取失败或样本中不含植物成分，那么其他任何目标的阴性结果都是不可信的。

植物源性成分的定性鉴定：

直接判断一个样本（如食品、饲料、未知粉末）中是否含有植物成分。

相对定量的参考：

在需要比较不同样本间目标基因含量时（如转基因作物的含量），18SrDNA的稳定拷贝数可以作为内参基因，对目标基因的检测结果进行归一化，从而得到更准确的相对定量结果。

二、 技术原理 - PCR-荧光探针法：

这种方法结合了PCR的高扩增效率和荧光探针的高特异性。

核酸提取：从待测样本（面粉、豆粉、植物叶片等）中提取总DNA。

特异性引物与探针：

引物：针对植物18S rDNA基因中高度保守且特异的区间设计。确保能检测绝大多数植物，而不与动物、微生物的18S rDNA发生交叉反应。

TaqMan探针：这是一条寡核苷酸探针，其两端分别标记了一个荧光报告基团 和一个荧光淬灭基团。

实时荧光PCR扩增与检测：

在PCR反应体系中，加入样本DNA、特异性引物和TaqMan探针。

当探针完整时，报告基团发出的荧光被淬灭基团吸收，检测不到信号。

在每轮PCR的退火/延伸阶段，Taq酶会发挥5'→3'外切酶活性，将探针水解。

探针水解后，报告基团与淬灭基团分离，从而发出荧光。

荧光信号与扩增产物量成正比。仪器实时监测荧光强度的增长。

三、 试剂盒的典型组成：

18S rDNA PCR反应液：包含针对植物18S rDNA的特异性引物和探针、dNTPs、缓冲液等。

Taq DNA聚合酶。

阳性对照：通常为已知含有植物DNA的溶液。

阴性对照：无核酸酶水。

说明书

四、 操作流程详解说明：

样本处理与DNA提取：按常规方法提取待测样本的基因组DNA。

配制PCR反应体系：按照说明书，将各组分与提取的DNA模板混合。

上机运行：

将反应管放入实时荧光PCR仪。

设置循环程序（通常为：预变性95℃ → 95℃变性，60℃退火/延伸并采集荧光信号，循环40-45次）。

结果分析：

仪器软件会生成扩增曲线。

阳性：在荧光通道中出现典型的“S”型扩增曲线，且Ct值小于设定的阈值（如35）。

阴性：无扩增曲线或Ct值大于阈值。

公司正在出售的产品：

五、 主要应用场景：

食品安全与转基因检测：

作为内标，确保转基因检测结果的可靠性。例如，在欧盟，许多转基因检测标准方法都强制要求使用植物内源基因（如18S rDNA， Lectin基因， Zein基因等）。

饲料成分鉴定：检测饲料中是否含有植物源性成分。

物种鉴定与溯源：对未知植物样本进行初步鉴定。

法医学与中药材鉴定：鉴别物证或中药材的真伪及植物来源。

六、 性能特点：

高灵敏度：由于18S rDNA在植物细胞中为多拷贝，该试剂盒可以检测到极微量的植物DNA。

高特异性：探针法进一步提高了检测的特异性，能有效区分植物与非植物材料。

准确定量：与SYBR Green法相比，探针法特异性更强，定量更准确，受非特异性扩增的影响小。

闭管检测：整个检测过程无需打开管盖，极大降低了气溶胶污染的风险。

快速高效：可在2-3小时内完成检测。