NPTII基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对NPTII基因的特异性保守序列设计特异性引物和TaqMan探针。探针上连接有荧光报告基团（如FAM）和荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会切断与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，从而实现对NPTII基因的特异性检测和定量。

高特异性：由于探针的存在，只有当引物和探针都与模板特异性结合时，才会产生荧光信号，大大降低了非特异性扩增带来的背景干扰。

主要优势：

高特异性：探针结合确保了检测结果的准确性。

高灵敏度：检出限通常可达0.1%（相对于内源基因），能够检测出极低含量的转基因成分。

定量能力：通过标准曲线，可以对样本中的NPTII基因含量进行绝对或相对定量。

�� 产品性能指标

根据同类产品的性能参数，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

反应体系  25 μL

适用仪器  ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480等实时荧光定量PCR仪

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

qPCR Mix：包含反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等。

引物探针混合液：预混了针对NPTII基因的特异性引物和TaqMan探针。

阳性对照 (PC)：含有NPTII基因片段的质粒或DNA。

阴性对照 (NC)：无模板对照（NTC）。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融，使用前需完全解冻并混匀。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的植物组织、食品或饲料样本。

使用CTAB法或商品化的DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为25 μL）：

qPCR Mix: 12.5 μL

引物探针混合液: 1-2 μL

模板DNA: 1-2 μL

无菌水: 补足至25 μL

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM）、反应程序并运行。

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 40，且扩增曲线有明显的指数增长期。

可疑：Ct值在 40-45 之间，建议复测或使用其他方法确认。

阴性：Ct值 > 45 或无Ct值。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。使用一次性吸头和专用工作服。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

公司正在出售的产品：

高特异性

引物设计基于目标基因保守区域，可区分高度同源序列（如病毒变异株）。

高灵敏度

检测限低至10拷贝/反应，适用于微量样本。

高效扩增

热启动酶（如HotStarTaq）减少非特异性扩增，30分钟内完成40个循环。

防污染设计

UNG酶系统降解残留产物，避免交叉污染。

稳定性提升

冻干预混技术实现常温运输，操作便捷。