人卵巢成纤维细胞 新品

人卵巢成纤维细胞

产品信息：

产品名称 人卵巢成纤维细胞

组织来源 卵巢组织
种属 人

产品规格 5×10^5Cells/T25

培养信息：

方法简介：实验室分离的人卵巢成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人卵巢成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品名称：人卵巢成纤维细胞

组织来源：卵巢组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液：0.25%胰蛋白酶人卵巢成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介 ：

人卵巢成纤维细胞分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育(右侧已退化)，呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的卵巢成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。卵巢成纤维细胞大多分布于卵巢表面，其主要特点和功能：①成纤维细胞在体外易于培养；②卵巢损伤后，成纤维细胞能修复和重塑卵巢；③能在卵巢炎症时有效控制炎症扩散。
原代细胞传代：

传代时机判断

细胞汇合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度汇合导致接触抑制，影响增殖能力

观察细胞状态：细胞形态正常，无明显漂浮、污染迹象

消化环节控制

消化前准备：吸出旧培养基，用PBS轻轻冲洗细胞1-2次，去除血清（血清会抑制胰蛋白酶活性）

消化液选择：同原代分离，根据细胞类型选择合适的消化酶，胰蛋白酶消化时间一般为1-5分钟，胶原酶消化时间为10-30分钟

消化终止：显微镜下观察到细胞回缩变圆、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化，血清浓度不低于10%

细胞吹打：用移液器轻轻吹打细胞，避免过度用力导致细胞破裂，吹打次数一般为10-15次

传代比例控制

传代比例根据细胞生长速度调整：生长速度快的细胞（如成纤维细胞）可按1:3-1:6传代，生长速度慢的细胞（如内皮细胞、神经细胞）按1:2传代

首次传代比例可适当提高（如1:2），待细胞适应体外培养环境后再调整为常规比例

传代后培养

接种后轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，放入培养箱中培养

24小时内不要晃动培养瓶，避免细胞贴壁不牢

培养24-48小时后观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基，去除未贴壁的死细胞和细胞碎片
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收货与处理流程：

1. 收货检查

收到细胞后首先观察T25培养瓶瓶身是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有异常及时联系。

2. 细胞复苏（仅针对冻存细胞）

将冻存管迅速放入37℃温水中摇晃融化，时间约1分钟

加入4-5ml完全培养基混匀，1000RPM常温离心4-5分钟

弃去上清液，补加1-2ml培养液吹匀，移入含5ml培养基的培养瓶中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度

3. 新鲜细胞处理

用75%酒精消毒培养瓶瓶身，拆下封口膜

放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，稳定细胞状态后再进行后续操作