pFMV35S基因核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是恒温荧光检测技术（通常为LAMP或类似原理）。

核心原理：针对FMV 35S启动子的特异性保守序列设计多组特异性引物。在恒定温度（通常为60-65℃）下，利用具有链置换活性的DNA聚合酶进行核酸扩增。反应过程中，随着DNA的大量合成，会产生荧光信号（通常通过荧光染料或探针实现）。仪器实时监测荧光信号的变化，从而判断样本中是否含有目标基因。

特异性：该试剂盒设计的引物能够特异性识别FMV 35S序列，可有效区分FMV 35S与同源性仅约60%的CaMV 35S启动子。

 主要优势：

操作简便：无需复杂的热循环（不像传统PCR需要反复升降温），反应程序简单。

快速高效：通常在45-60分钟内即可完成检测并得到结果。

高灵敏度：检出限可达1×10³ 拷贝/毫升（或100-500拷贝/毫升），能够检测出极低浓度的靶基因。

�� 产品性能指标

根据同类产品的性能参数，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

反应时间  约 45 - 60 分钟

适用样本  农作物植株、米粉、面粉、豆制品、米制品、婴幼儿辅食、罐头食品、薯类和膨化食品、植食性饲料等。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

反应液A：通常包含反应缓冲液、dNTPs等。

反应液B：通常包含酶混合物（Bst DNA聚合酶等）。

显色液/C液：通常包含荧光染料。

阴性对照 (NG)：无模板对照。

阳性对照 (PG)：含有目标片段的质粒或DNA。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下保存（部分组分如显色液可能需避光保存），运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的植物组织、食品或饲料样本。

使用配套的DNA提取试剂或CTAB法等，提取样本的粗提DNA或纯化DNA作为模板。

反应体系配置

在冰上操作，按照说明书比例混合反应液A、反应液B和显色液，配制预混液。

将预混液分装到PCR管或八联管中。

加样

向分装好的反应管中加入提取的DNA模板（或阴性/阳性对照）。

充分混匀，离心去除气泡。

恒温扩增与检测

将反应管放入恒温荧光检测仪（如Dhelix系列、Genie II等）中。

设置反应温度（通常为63℃）和时间（通常为60分钟），并选择荧光通道进行实时监测。

结果判读

阳性：反应曲线呈明显的指数增长，且有清晰的平台期，仪器自动判读为“阳性”。

阴性：无扩增曲线或Ct值大于设定阈值（如38或40），仪器自动判读为“阴性”。

⚠️ 注意事项

防止污染：由于灵敏度极高，实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。反应结束后严禁开盖，应直接丢弃入密封袋中处理。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

仪器兼容性：该试剂盒适用于恒温荧光检测仪，也可在部分荧光定量PCR仪（如ABI 7500）上通过设置恒温程序运行。

方法优势

相较于传统的细菌培养法（耗时长、生物安全要求极高）或血清学检测（窗口期长），荧光PCR法具有显著优势：

高特异性： 通过针对鼠疫杆菌特异性基因（如caf1、pla）设计的引物和探针，能够精准识别目标菌，有效区分近缘菌种（如假结核耶尔森氏菌），避免假阳性。

高灵敏度： 检测灵敏度极高（部分产品最低检测限可达1-10 CFU/mL或10-100拷贝/毫升），有助于在感染早期、菌血症含量较低或样本经过抗生素治疗后做出准确判断。

快速高效： 从样本DNA提取到出结果通常在数小时内完成，远快于传统培养法（通常需要数天），适合在突发公共卫生事件中对大量样本进行快速筛查。

安全便捷： 采用闭管检测模式，扩增后无需开盖处理，大大降低了扩增产物污染和操作人员接触高致病性病原体的风险。部分试剂盒采用预混冻干技术，便于试剂的储存和运输。

公司正在出售的产品：

污染防控：

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯吸头。

实验后用10%次氯酸或紫外灯清洁工作台。

假阴性处理：

检查样本抑制物（如使用内标基因）。

试剂保存：

-20℃避光保存，避免反复冻融。