pFMV35S基因检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

1. 检测原理：恒温荧光技术

该试剂盒通常基于 LAMP（环介导等温扩增） 或类似的恒温扩增技术，并结合荧光染料（如 SYTO-9 或钙黄绿素）进行实时检测。

核心机制：利用 4-6 条特异性引物识别靶序列的 6-8 个位点，在恒定温度（通常为 60℃-65℃）下进行扩增。

结果判读：反应过程中，随着 DNA 的大量合成，荧光信号会显著增强。仪器实时监测荧光变化，自动生成扩增曲线。

优势：相比传统的 PCR 法，恒温法不需要热循环（即不需要反复升降温），反应速度更快（通常 30-60 分钟），且对抑制物的耐受性更强。

 2. 试剂盒组成

以常见的 48 测试/盒规格为例，主要组分如下：

组分名称 描述 保存条件

反应液 (A 液) 含 dNTPs、缓冲液、荧光染料 -20℃ 避光保存

酶液 (B 液) 含 Bst DNA 聚合酶等 -20℃ 保存

阳性对照 (PG) 含 pFMV35S 基因片段的质粒 -20℃ 保存

阴性对照 (NG) 无菌水 4℃ 或 -20℃ 保存

增强液 (C 液) 部分试剂盒包含，用于优化反应 -20℃ 保存

 3. 适用范围与背景

应用领域：主要用于转基因成分的快速筛查。

检测样本：适用于农作物植株、种子、面粉、米粉、豆制品、饲料等加工品。

检出限：灵敏度通常较高，检出限可达 0.5% 左右（视具体品牌而定）。

 4. 操作流程详解

样本前处理：

取少量样品（如叶片或粉末），使用植物基因组 DNA 快速提取试剂盒（通常配套或自备）提取粗提 DNA。

体系配置（冰上操作）：

按照说明书比例混合反应液、酶液。

将混合液分装至 PCR 管中。

加样顺序：先加阴性对照，再加待测样本，最后加阳性对照（防止污染）。

恒温扩增：

将 PCR 管放入恒温荧光检测仪（如 Dhelix 系列、Genie II 等）。

设置反应温度为 63℃（具体视说明书而定），反应时间通常为 60 分钟。

结果判读：

阳性（+）：仪器屏幕上显示明显的“S”型扩增曲线，且荧光信号显著增强。

阴性（-）：无扩增曲线，荧光信号无明显变化（保持基线水平）。

 5. 关键注意事项

防污染（重中之重）：

恒温扩增产物浓度极高，极易产生气溶胶污染。严禁在扩增区打开扩增后的管盖。

实验室应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），各区物品不得混用。

避光保存：反应液中的荧光染料对光敏感，配制过程及试剂保存均需避光。

离心操作：试剂解冻后及加样前，必须进行瞬时离心（约 30 秒），防止液体挂壁导致浓度不准。

仪器适配：虽然该方法对仪器要求较低，但不同品牌的恒温荧光仪（如 ABI 7500 也可以跑，但需调整模式）的荧光通道设置可能不同，使用前请确认仪器是否支持该试剂盒的荧光染料波长。

 总结

该试剂盒是转基因筛查的有力工具，特别适合现场快速检测或基层实验室使用。如果你是质检或农业检测人员，建议在操作时严格遵守“单向流动”原则（从试剂准备到扩增，不逆行），以确保结果的准确性。