β1,3葡聚糖酶（β1,3GA）测试盒
基本信息
测定意义：β-1,3-GA（EC3.2.1.73）主要存在于植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
测定原理：β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂盒组成（以可见分光光度法为例）
试剂名称 规格 保存条件 使用说明
酸性提取液 25mL×1瓶 4℃保存 直接使用
碱性提取液 25mL×1瓶 4℃保存 直接使用
试剂一 液体5mL×1瓶 4℃保存 直接使用
试剂二 液体1.5mL×1支 4℃保存 直接使用，不可冷冻，使用时在冰上放置
试剂三 粉剂×1支 -20℃保存 用时加入1.6mL双蒸水，混匀，4℃保存一周
试剂四 粉剂×1支 4℃保存 用时加入1.9mL双蒸水，混匀，4℃保存一周
试剂五 液体0.7mL×1支 4℃保存 直接使用
试剂六 液体10mL×1瓶 4℃保存 直接使用
试剂七 自备 / 19.2mL乙醇和0.8mL蒸馏水充分混合备用
NAD标准品 粉剂×1支 -20℃保存 临用前加入1.5mL蒸馏水，配制成2umol/mL，再稀释为1.25nmol/mL的NAD标准溶液备用
NADH标准品 粉剂×1支 -20℃保存 临用前加入1.4mL蒸馏水，配制成2umol/mL，再稀释为1.25nmol/mL的NADH标准溶液备用
样本处理及要求
植物组织
称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。
细菌或细胞
先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清。
按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min。
10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。
血清（浆）样品
取100μL血清（浆）加入1mL提取液，充分混匀。
之后置沸水浴振荡提取10分钟，10000g，常温离心10分钟，取上清，冷却后待测。
通用要求
样本最好无溶血、脂血、黄疸的现象，组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。
样本处理后最好尽快进行检测，且保存于冰盒之上，待测。
样本需澄清，若不澄清，需离心后取上清进行检测（特殊指标除外）。
样本值应在试剂盒线性范围内，若超过线性范围，需稀释后再进行检测，若低于检测范围，需增加样本浓度后进行检测。
请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20℃或-70℃保存。
操作步骤
试剂准备：试剂三置于37℃水浴中预热30min。
空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。
标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。
对照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸馏水，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。
测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。空白管和标准管只需测定一次。对照管只需要做一管。若对照管吸光值大于1，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μL试剂二原液+60μL蒸馏水）。
注意事项
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
按照试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
底物A易挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好，不同批号的试剂不要混用。
若样本浓度过高，需稀释后再进行检测，计算结果时需乘以稀释倍数。
实验过程中，要注意实验材料的洁净和操作的细致，避免污染和误差。
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