总抗氧化能力（DPPH法）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

总抗氧化能力是生物体系中所有抗氧化物质和抗氧化酶总活性的综合体现，其主要意义包括：氧化应激评估：直接反映体内氧化还原平衡状态，是氧化应激的重要指标疾病诊断：与心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病、癌症等密切相关营养评估：评价食品、保健品、中草药等的抗氧化活性药物筛选：作为抗氧化药物研发和疗效评价的重要指标环境监测：评估生物对环境污染、辐射等胁迫的响应

测定原理

采用DPPH自由基清除法，DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一种稳定的氮中心自由基，在515nm波长下有强吸收，其醇溶液呈深紫色。当加入抗氧化剂时，DPPH自由基被还原成无色的DPPH-H，溶液颜色变浅，515nm处吸光度下降，吸光度变化与自由基被清除的程度成正比，以此量化样本的总抗氧化能力。

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂一 液体40mL×1瓶 含0.1mM DPPH的甲醇溶液，反应底物，与抗氧化剂反应生成无色化合物

试剂二 液体80mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取

试剂三 液体1mL×1支 含100μmol/L Trolox标准品，用于建立标准曲线

说明书 1份 包含详细实验步骤、计算方法和注意事项

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度计/酶标仪（515nm检测通道）

低温离心机（≥10000g）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）

研钵/组织匀浆器（冰浴专用）

沸水浴装置（可选，用于植物样本前处理）

必备耗材

1mL玻璃/石英比色皿/96孔板

离心管（1.5mL、10mL）

一次性无菌吸头

手术剪/镊子（用于组织样本处理）

自备试剂

蒸馏水/去离子水

生理盐水（0.85% NaCl）

甲醇/无水乙醇（用于配制DPPH溶液）

抗凝剂（肝素/柠檬酸钠，仅用于血浆样本）

样本前处理方法

血浆/血清样本血浆样本：静脉采血后立即加入肝素或柠檬酸钠抗凝（避免使用EDTA），5000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测血清样本：静脉采血室温静置30min，血液凝固后5000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测样本可直接检测，活性过高时用试剂二稀释1-5倍

尿液/唾液样本取新鲜尿液或唾液，5000g 4℃离心10min去除沉淀取上清液置冰上待测，可直接检测或根据需要用试剂二稀释

动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL预冷试剂二，冰浴匀浆10000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测若活性过高，可用试剂二稀释1-10倍后测定

细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清按照细胞/细菌数量(10⁴个):试剂二体积(mL)=500~1000:1的比例加入试剂二（建议500万细胞加入1mL试剂二）冰浴超声波破碎细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）10000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测

植物提取物/食品样本取干燥植物粉末/食品约0.05g，加入1mL试剂二，40℃水浴浸提30min10000rpm室温离心10min，取上清液置冰上待测液体样本（如红酒、果汁）取100μL加入900μL试剂二，振荡混匀后离心取上清

测定操作步骤

标准曲线建立将100μmol/L Trolox标准品用试剂二稀释成0、10、20、40、60、80、100μmol/L系列浓度取比色管/96孔板，加入标准品溶液20μL + 试剂一380μL，充分混匀室温避光反应20min，515nm波长下测定吸光度以Trolox浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线

样本测定（微量法）分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到51px，蒸馏水调零取96孔板，设置空白孔、标准品孔、样本孔空白孔：加入试剂二20μL + 试剂一380μL样本孔：加入样本20μL + 试剂一380μL充分混匀，室温避光反应20min，515nm波长下测定吸光度（A空白、A样）若A样小于0.2，需用试剂二稀释样本后重新测定

样本测定（常规法）取比色管，分别加入样本0.5mL + 试剂一0.5mL，混匀室温避光反应30min，515nm波长下测定吸光度（A样）空白管：加入试剂二0.5mL + 试剂一0.5mL，同样处理（A空白）

结果计算方法

单位定义

μmol Trolox/mL：每毫升样本清除DPPH自由基的能力相当于同摩尔浓度的Trolox

μmol Trolox/g 鲜重：每克组织鲜重清除DPPH自由基的能力

清除率%：样本清除DPPH自由基的百分比

计算公式

自由基清除率： DPPH自由基清除率(%)=A空白−A样A空白×100%DPPH自由基清除率(%)=A空白A空白−A样×100%

以Trolox当量表示的总抗氧化能力： 总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=A空白−A样ΔA标准×C标准×D总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=ΔA标准A空白−A样×C标准×D

ΔA标准：标准品吸光度变化值

C标准：标准品浓度（μmol/mL）

D：样本稀释倍数（未稀释则为1）按组织鲜重计算： 总抗氧化能力(μmol Trolox/g鲜重)=总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)×V总W总抗氧化能力(μmol Trolox/g鲜重)=W总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)×V总

V总：样本提取液总体积（mL）

W：组织鲜重（g）

性能指标

指标 要求

线性范围 0~100μmol Trolox/mL，线性相关系数r≥0.995

最低检测限 ≤1μmol Trolox/mL

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免长时间放置导致抗氧化物质降解；-80℃可保存1个月

匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃

样本需避免氧化，处理过程中尽量减少与空气接触

试剂使用：

DPPH溶液对光敏感，配制后需避光保存，且易挥发，反应时建议密封

标准品需现配现用，避免降解

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应需在室温避光条件下进行，避免光照和温度影响

若吸光度值变化过大，需稀释样本后重新测定

有色样本需设立对照管，以消除样本本身颜色的干扰

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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