总抗氧化能力检测试剂盒（DPPH法）微量法

总抗氧化能力（DPPH法）试剂盒说明书

                                                               微量法100T/96S

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义： 

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中 

常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。 

测定原理： 

DPPH·为稳定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等极性溶剂中，在 515nm 处有最大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化剂时，会发生脱色反应，因此可用吸光度的变化并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。

组成：

提取液使用前需要预冷 

自备仪器和用品：

酶标仪、低温台式离心机、可调式移液器、96孔板、恒温水浴锅、冰和蒸馏水。

样品的制备：

1. 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。 

(2) 组织样品 

按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 

(3) 细胞样品 

按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1ml 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1. 酶标仪预热30min以上，调节波长至515nm。

2. 样本测定

注意：

1.空白管只需测定一次，若 A 测定小于 0.2，需用提取液稀释样品后进行检测。

2.反应结束后若溶液中存在絮状沉淀，需要2000xg离心10min，取上清进行检测。

总抗氧化能力计算公式： 

1、以自由基清除率表示： 

DPPH 自由基清除率（％）=（A 空白-A 测定）÷A 空白×100％ 

2、以标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量表示： 

标准曲线：y = 0.7072x - 0.0081   R2 = 0.9977                 x:Trolox 浓度(μmol/ml) 

y:吸光值差值△A 

单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量来表示样本的DPPH自由基清除能力。 

（1）按样本质量计算 

总抗氧化能力（μmol Trolox/g 鲜重）=（△A+0.0081）÷0.7072×V 样÷(V 样÷V 样总×W) 

=1.414×（△A+0.0081）÷W 

（2）按样本蛋白浓度计算 

总抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A+0.0081）÷0.7072×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr) 

=1.414×（△A+0.0081）÷Cpr 

(3) 按细胞计算 

总抗氧化能力（μmol Trolox/104cell）=（△A+0.0081）÷0.7072×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个） 

= 1.414×（△A+0.0081）÷ 细胞数量（万个） 

（4）按液体体积计算 

总抗氧化能力（μmol Trolox/ml）=（△A+0.0081）÷0.7072 

=1.414×（△A+0.0081） 

V 样总：加入提取液体积，1 ml；V 样：反应中样品体积，20μl；W：样品质量，g；Cpr： 

样本蛋白浓度，mg/ml 

注意事项： 

1. 尽量避免使用在酸性条件下呈红色或接近红色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生 

干扰。 

2. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反 

应的还原剂。 

3. 若液体样本为碱性，需要用提取液稀释至酸性后再检测。