胰蛋白酶测试盒
测定意义与原理
测定意义
胰蛋白酶（EC3.4.21.4）是胰腺分泌的一种丝氨酸蛋白酶，主要作用是分解蛋白质，其活性检测具有重要意义：临床诊断：诊断和监测胰腺疾病、胃肠疾病、肝脏疾病等疾病监测：评估消化功能、组织损伤程度和治疗效果生物学研究：了解消化生理、细胞凋亡和细胞增殖机制工业应用：评估食品、饲料、制药等行业的酶制剂活性药物研发：筛选胰蛋白酶抑制剂，用于治疗胰腺炎、癌症等
测定原理
比色法/分光光度法：胰蛋白酶在碱性条件下水解底物（如BAPNA）生成对硝基苯胺，对硝基苯胺在405nm处有最大吸收峰，吸光度变化反映了胰蛋白酶的活性高低。反应式如下： BAPNA→胰蛋白酶对硝基苯胺+其他产物BAPNA胰蛋白酶对硝基苯胺+其他产物
ELISA法：利用特异性抗体与胰蛋白酶结合，通过酶标二抗检测结合的胰蛋白酶，根据吸光度值计算胰蛋白酶含量。
试剂盒组成
比色法/分光光度法试剂盒
组分 规格 作用说明
提取液 液体60mL×1瓶 用于提取样本中的胰蛋白酶
试剂一 液体45mL×1瓶 含反应缓冲液，用于提供适宜的反应pH环境
试剂二 粉剂×1瓶 含BAPNA溶液，反应底物
标准品 1mL×1支 含对硝基苯胺标准液，用于建立标准曲线
ELISA法试剂盒
组分 规格 作用说明
包被板 96孔×1块 预包被抗胰蛋白酶单克隆抗体
酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗胰蛋白酶抗体
标准品 液体1mL×6管 含0.1-10ng/mL胰蛋白酶标准品
样本稀释液 10mL×1瓶 用于稀释样本和标准品
显色剂A液 6mL×1瓶 含过氧化氢溶液
显色剂B液 6mL×1瓶 含TMB溶液
终止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液
20倍浓缩洗涤液 20mL×1瓶 用于洗涤酶标板
自备仪器与试剂
必备仪器
比色法/分光光度法：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿/96孔板、研钵、电子天平
ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机、可调式移液器、台式离心机
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、超声破碎仪
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水
样本前处理方法
动植物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
细胞/微生物样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
血清/血浆样本
血清(浆)样品：直接检测
食品/饲料样本提取：称取适量样本，加入提取液，振荡提取30min离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
测定操作步骤
比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到405nm，蒸馏水调零试剂配制：
试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：
试剂名称(μL) 空白管 测定管
蒸馏水/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 200 200
混匀后37℃水浴10min，记录405nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将对硝基苯胺标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，同样处理，测定405nm处的吸光值，绘制标准曲线
ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度
结果计算方法
单位定义
U/mg prot：每毫克组织蛋白每分钟生成1μg对硝基苯胺的酶量
U/g 鲜重：每克组织每分钟生成1μg对硝基苯胺的酶量
U/L：每升样本每分钟生成1μg对硝基苯胺的酶量
U/g 干重：每克干物质每分钟生成1μg对硝基苯胺的酶量
比色法/分光光度法计算公式
胰蛋白酶活性(U/mg prot)=(A测定−A空白)×V总Cpr×V样×T×K胰蛋白酶活性(U/mg prot)=Cpr×V样×T(A测定−A空白)×V总×K
A测定：样本管吸光度值
A空白：空白管吸光度值
V总：反应体系总体积（mL）
Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）
V样：样本体积（mL）
T：反应时间（min）
K：标准曲线斜率（μg对硝基苯胺/吸光度单位）
ELISA法计算公式
胰蛋白酶含量(ng/mL)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数胰蛋白酶含量(ng/mL)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数
性能指标
指标 比色法/分光光度法 ELISA法
线性范围 0~50U/L 0.1-10ng/mL
最低检测限 ≤0.1U/L ≤0.05ng/mL
回收率 90%~110% 90%~110%
批内精密度 CV≤1.7% CV≤5.0%
批间精密度 CV≤5.0% CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免胰蛋白酶失活；-20℃可保存3个月
组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活
液体样本需避免溶血和细菌污染
食品/饲料样本需按比例提取，避免杂质干扰
试剂使用：
试剂需临用前配制，避免氧化失效
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
标准品需4℃保存，避免反复冻融
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）
加入样品启动反应后3秒内即刻比色测定
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
公司正在出售的产品
百日咳毒su检测试剂盒 PT ELISA Kit | GM12878人B淋巴细胞 |
高速泳动蛋白17检测试剂盒 HMG-17 ELISA Kit | 小鼠原代肾小球内皮细胞 |
免疫球蛋白A Fc段受体Ⅰ检测试剂盒 FcαRⅠ/CD89 ELISA Kit | 小鼠肾小球内皮细胞 |
免疫反应性生长检测试剂盒 irGH ELISA Kit | 小鼠肾集合管细胞(SV40转化)M-1（种属鉴定） |
锰超氧化物歧化检测试剂盒 SOD2 ELISA Kit | MCF 7B (人乳腺癌细胞) |
镁依赖性磷SUAN1检测试剂盒 MDP1 ELISA Kit | 大鼠肺动脉平滑肌细胞 |
美洲商陆su检测试剂盒 PWM ELISA Kit | 大鼠主动脉外膜成纤维细胞 |
干扰su诱导跨膜蛋白1检测试剂盒 IFITM1/CD225/IFI17 ELISA Kit | 人增生性瘢痕成纤维细胞 |
梅毒螺旋体检测试剂盒 IgG ELISA Kit | 小鼠脑微血管内皮细胞 |
程序性死亡因子配体1检测试剂盒 PD-L1/CD274 ELISA Kit | PC-12 (未分化) (大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)) (种属鉴定正确) |
毛细血管扩张性共济失调突变基因检测试剂盒 ATM ELISA Kit | NCI-H1975人肺腺癌细胞 |
麦考酚SUAN检测试剂盒 MPA ELISA Kit | HEY A8人卵巢癌细胞专用培养基 |
麦角蛋白IgA检测试剂盒 Gliadin-IgA ELISA Kit | 胰蛋白酶测试盒rRTEC大鼠肾小管上皮细胞 |
麻疹病毒IgM检测试剂盒 MV IgM ELISA Kit | 大鼠原代卵巢内膜细胞 |
麻疹病毒检测试剂盒 MV ELISA Kit | 人非霍奇金淋巴瘤Karpas 422(STR鉴定正确) |
