胰蛋白酶测定试剂盒，BAEE法 新品

胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒（BAEE法）说明书

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。

测定原理：

胰蛋白酶能够催化N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（N-Benzoyl-L-Arginine-Ethylester，BAEE）中酯键水解，生成N-苯甲酰-L-精氨酸（N-Benzoyl-L-Arginine，BA），产物在253 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征胰蛋白酶的活性。胰蛋白酶在一定范围内与253nm处吸收值的升高呈良好的线性关系。

粗酶液提取：

1、组织样品：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）冰浴匀浆，15000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到253 nm，使比色池内的温度保持在25.0℃±0.5℃。

2. 工作液的配制：临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）=1 mL：9 mL的比例充分混合。未使用完的工作液于4℃保存。

3. 吸取67μl样本，加入1mL工作液，混匀后立即测定，在253 nm的波长处，每隔1分钟读取吸光度，共5分钟。计算每分钟△A=A2-A1。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图。

注意：应适当稀释或浓缩酶液，使测定所得吸光度变化曲线线性较高。

胰蛋白酶活性计算公式：

使用石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按蛋白浓度计算

活性单位定义：25.0℃±0.5℃下，每分钟内降解 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(BAEE)所需的酶量。

胰蛋白酶（U/mg prot）= △A÷0.009 ÷（Cpr×V1）÷T

（2）按样本质量计算

活性单位定义：25.0℃±0.5℃下，每分钟内降解 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(BAEE)所需的酶量。

胰蛋白酶（U/g 鲜重）= △A÷0.009÷（W×V1÷V2）÷T

Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：组织质量（g），0.1g；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），0.067 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V反总：反应总体积，1.067 mL；T：反应时间（min），1 min。

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