非洲猪瘟/高致病性猪蓝耳病毒（ASFV/PRRSV-M）核酸检测试剂盒（双重荧光PCR法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒采用双重TaqMan荧光探针技术，可同步特异性检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪蓝耳病毒(PRRSV-M株)的核酸，具有高灵敏度（最低检测限1×10³ copies/mL）、高特异性（≥99%）和快速检测（1-2小时）的特点，适用于猪场混合感染鉴别诊断、疫情监测及公共卫生应急，但需注意其结果需结合临床症状综合判断且对样本质量要求高。

一、核心作用与检测原理

该试剂盒主要用于同步检测猪鼻咽拭子、肺组织、淋巴结、血清等样本中的非洲猪瘟病毒和高致病性猪蓝耳病毒，其核心原理基于：

双重靶标设计：FAM通道靶向ASFV p72基因保守区，HEX通道靶向PRRSV-M Nsp2基因变异段（北美型高致病株特征序列）

内参系统：部分试剂盒含猪RNase P基因（Cy5通道）作为内参，监控样本质量和提取效率

技术优势：单次反应即可完成两种重大疫病的精准筛查，避免单一病原漏检，特别适用于临床症状相似的混合感染鉴别诊断12

二、产品性能与规格参数

性能指标  参数说明

检测方法  双重TaqMan荧光定量PCR

规格  50T/盒（常见规格）

保存条件  -20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（<5次）

有效期  12个月（部分产品可达2年）

适用仪器  ABI 7500、LightCycler、Bio-Rad CFX96等主流荧光定量PCR仪

检测范围  2×10³～1×10⁸ copies/mL

最低检测限  1×10³ copies/mL（部分产品可达100-500拷贝/mL）

检测时效  1-2小时（含核酸提取），较传统培养法（24-48小时）效率大幅提升

特异性  ≥99%，不与犬、牛等其他常见动物DNA交叉反应

检测时效  1-2小时（含核酸提取），较传统培养法（24-48小时）效率大幅提升

三、操作流程与结果判读

核心操作步骤

样本采集与处理：采集鼻咽拭子、肺脏或淋巴结样本，置于病毒保存液中，2-8℃保存并立即送检

核酸提取：使用磁珠法或离心柱法提取RNA，避免反复冻融导致降解

试剂配制：将试剂盒从-20℃取出，室温平衡10分钟，按说明书比例混合反应液和酶液

扩增反应：

预变性：95℃ 5分钟

扩增：40个循环（95℃ 15秒 → 60℃ 60秒，荧光信号于60℃采集）

结果判读标准

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈明显指数增长

可疑：35＜Ct值≤37（或38，不同试剂盒标准略有差异），建议重复检测确认

阴性：Ct值＞37（或38），无明显扩增曲线

实验有效性：阴性对照无扩增或Ct值＞38，阳性对照Ct值≤32且呈"S"型曲线

四、应用场景与核心优势

主要应用场景

混合感染鉴别：同步检测ASFV和PRRSV-M，避免临床症状相似导致的误诊

疫情监测：适合大规模筛查，支持批量样本处理，可用于屠宰厂、农贸市场等场点监测

引种检疫：检测引进种猪是否携带ASFV或PRRSV-M，防止新毒株引入

公共卫生应急：可用于非洲猪瘟等重大动物疫情的快速筛查

核心优势

双重检测机制：单管反应同时检测两种病原体，提高检测效率，避免单一靶标检测的假阴性

高灵敏度：可检测低至1×10³ copies/mL的病毒载量，显著优于传统病毒培养法（需10⁴-10⁵ CFU/mL）

特异性强：针对p72和Nsp2基因的特异性保守区域设计引物，避免交叉反应

操作便捷：部分试剂盒采用一体化设计，减少人工操作步骤，支持自动化批量处理

五、局限性与关键注意事项

无法区分活病毒：PCR检测不能区分活病毒与死病毒，阳性结果需结合临床症状和病毒分离结果综合判断

样本质量依赖：样本采集、运输和保存不当会导致RNA降解，影响检测结果，需使用病毒保存液并-80℃保存

基因变异影响：ASFV和PRRSV均为RNA病毒，易发生基因突变，可能导致引物结合位点改变，产生假阴性

窗口期限制：感染初期（前3-5天）病毒载量最高，采样时间影响检出率

疫苗干扰：对于PRRSV-M检测，若使用了相关活疫苗，免疫后一段时间内可能检出阳性，需结合免疫史解读结果

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注意事项

实验操作规范

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率。

污染防控

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染。