非洲猪瘟/高致病性猪蓝耳病毒（ASFV/PRRSV-M）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

非洲猪瘟/高致病性猪蓝耳病毒（ASFV/PRRSV-M）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

试剂简介：

非洲猪瘟/高致病性猪蓝耳病毒（ASFV/PRRSV-M）检测试剂盒（双重荧光PCR法）是一种基于实时荧光定量PCR技术的双重检测试剂盒，

能够同步检测非洲猪瘟病毒（ASFV）和高致病性猪蓝耳病毒（PRRSV-M株）的特异性核酸。

该试剂盒采用双重实时荧光定量PCR技术，针对猪场混合感染鉴别诊断需求开发，单次反应即可完成两种重大疫病的精准筛查，为猪群健康管理提供高效解决方案。

检测原理与技术特点

双重检测体系：

FAM通道：靶向ASFV p72基因（保守区）

HEX通道：靶向PRRSV-M Nsp2基因变异段（北美型高致病株特征序列）

内参基因：猪RNase P（Cy5通道）监控样本质量

核心优势：

高灵敏度：最低检出限达100-500拷贝/mL，显著高于传统培养法

强特异性：采用荧光探针法，避免与其他链球菌交叉反应，特异性≥99%

快速高效：全程检测时间1-2小时（含核酸提取），较培养法（24-48小时）效率提升显著

操作流程与步骤

样本处理：

核酸提取：推荐使用磁珠法或离心柱法提取样本核酸，避免反复冻融导致降解

样本类型：适用于阴道拭子、直肠拭子及尿液样本

试剂准备：

试剂解冻：将试剂盒从-20℃取出，室温平衡10分钟

反应体系配制：按说明书比例混合反应液和酶液，每管加入5μL模板核酸，终体积20μ

PCR扩增：

仪器设置：使用ABI 7500、LightCycler等荧光定量PCR仪

扩增程序：95℃ 5分钟预变性；95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（40个循环）

性能参数与应用价值

技术参数：

检测范围：2×103～1×10? copies/mL

最低检测限：1×103 copies/mL

包装规格：50T

临床应用：

混合感染鉴别诊断：同步检测ASFV和PRRSV-M，避免单一病原漏检

疫情监测：适合大规模筛查，支持批量样本处理

公共卫生应急：可用于禽流感等新发突发传染病的筛查

注意事项与操作要求

质量控制：

需设置阴性对照和阳性对照，确保实验有效性

操作需在无RNase环境下进行，防止RNA降解12

样本保存：

提取后核酸需立即检测或-20℃短期保存（≤1周）

避免反复冻融，运输时建议2-8℃冰袋保存

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