猪瘟野毒株/非洲猪瘟病毒（CSFV-W/ASFV）核酸检测试剂盒（双重荧光PCR法） 新品

 产品介绍：

猪瘟野毒株/非洲猪瘟病毒（CSFV-W/ASFV）核酸检测试剂盒（双重荧光PCR法）是一种基于双重实时荧光定量PCR（Duplex qPCR）技术的兽医分子诊断产品。该试剂盒专门用于体外定性检测猪的临床样本中是否存在猪瘟病毒野毒株（Classical Swine Fever Virus-Wild strain, CSFV-W）和非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus, ASFV）的特异性核酸。

猪瘟（CSF）和非洲猪瘟（ASF）均为世界动物卫生组织（WOAH）规定的A类传染病，也是我国生猪养殖业中危害最严重的两种病毒性疫病。该试剂盒通过在一个反应体系中同时检测这两种高致死率病原体，并能区分猪瘟野毒感染与疫苗免疫（通过配套的鉴别试剂盒或特定设计），为疫情的早期快速鉴别、紧急处置及防控净化提供了精准、高效的工具。

检测原理：双重荧光定量PCR

该试剂盒的核心原理是利用TaqMan探针法，针对两种病毒的特异性基因序列进行同步扩增和检测：

靶标基因选择：

猪瘟病毒野毒株 (CSFV-W)：针对猪瘟病毒基因组的高度保守区域设计特异性引物和探针，通常位于5'-UTR非编码区或E2囊膜糖蛋白基因。为了区分野毒感染与猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）免疫，部分鉴别试剂盒会针对疫苗株的特异性标记（如缺失序列）设计探针，但本通用型试剂盒主要检测所有CSFV野毒株。

非洲猪瘟病毒 (ASFV)：针对非洲猪瘟病毒的高度保守基因设计特异性引物和探针，通常位于p72基因（B646L，衣壳蛋白基因）、p30基因（CP204L）或MGF基因区域。p72基因是目前OIE推荐和行业内最常用的检测靶标。

双重检测机制：

FAM通道：通常用于检测非洲猪瘟病毒（ASFV）。若样本中含有ASFV，FAM荧光信号会随PCR扩增而增强。

HEX/VIC/Cy5通道：通常用于检测猪瘟病毒野毒株（CSFV-W）。若样本中含有CSFV，该通道荧光信号会随PCR扩增而增强。

结果判定：通过分析两个通道的扩增曲线和Ct值，可以判断样本中是单一感染（仅CSFV或仅ASFV）还是混合感染（CSFV和ASFV同时存在）。

内标系统：部分试剂盒会引入内源性内标（如猪源性内参基因，标记为ROX），用于监控样本采集质量、核酸提取效率及PCR反应体系是否存在抑制物，防止假阴性。

核心组分与性能参数

PCR反应预混液：包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺缓冲液、UNG酶（防污染）及两组特异性引物探针混合物。

阴阳性对照：

阳性对照：含有CSFV和ASFV目标片段的质粒混合物或灭活病毒液（PTC）。

阴性对照：无核酸酶的水（NTC）。

阳性对照：含有CSFV和ASFV目标片段的质粒混合物或灭活病毒液（PTC）。

关键性能参数：

最低检测限 (LOD)：通常可达 1×10³ copies/mL。

检测范围：通常为 2×10³ ~ 1×10⁸ copies/mL。

特异性：与其他猪常见病原体（如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等）无交叉反应。

检测时间：从核酸提取到出结果通常仅需 2-3 小时。

规格：常见规格为 50T/盒。

临床应用与意义

高热综合征的快速鉴别：当猪群出现高热、皮肤发绀、出血性病变等临床症状时，快速鉴别是猪瘟野毒感染、非洲猪瘟感染还是混合感染，为临床处置提供依据。

混合感染的检测：在临床上，猪瘟和非洲猪瘟可能存在混合感染，该试剂盒能同时检出两种病毒，避免漏诊。

进出口检验检疫：作为国际贸易中猪病检测的依据，符合WOAH的检测标准。

疫病净化与监测：用于种猪场的定期监测，评估猪群健康状况。

优势与局限性

特性  描述

一管双检  同时检测猪瘟野毒和非洲猪瘟，节省样本、试剂和检测时间，降低检测成本。

高灵敏度  可检测出极低含量的病毒核酸，优于传统的病毒分离培养法。

高特异性  引物探针针对特异基因设计，不易与其他猪病病原体交叉反应。

快速高效  相比病毒分离（需数天），qPCR检测仅需数小时，适合大规模筛查。

局限性  检测结果受样本采集质量（如抗凝血是否溶血）及核酸提取效率影响大；高度降解的样本可能导致假阴性。

操作与解读注意事项

样本采集：

猪瘟病毒：建议采集抗凝全血（EDTA抗凝）、脾脏、淋巴结或扁桃体组织。

非洲猪瘟病毒：建议采集抗凝全血（EDTA抗凝）、血清、脾脏、淋巴结或肌肉组织。

核酸提取：需使用专门的病毒DNA/RNA提取试剂盒（ASFV为DNA病毒，CSFV为RNA病毒，部分试剂盒需提取总核酸），避免抑制物残留。

防污染：PCR实验室必须严格分区，使用带滤芯的吸头，防止扩增产物气溶胶污染导致假阳性。

结果判读标准：

阳性：FAM或HEX/VIC通道Ct值 ≤ 35-38（参照说明书），且扩增曲线呈典型的“S”型指数增长。

阴性：FAM和HEX/VIC通道均无扩增曲线，或Ct值 > 38-。

公司正在出售的产品：

应用场景与产品选择建议

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）