猪瘟野毒株/非洲猪瘟病毒（CSFV-W/ASFV）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

猪瘟野毒株/非洲猪瘟病毒（CSFV-W/ASFV）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

简介：

本试剂盒是一种用于同时检测和鉴别猪瘟病毒野毒株和非洲猪瘟病毒的顶级分子诊断工具。其设计旨在应对复杂的疫病形势，能够在一次检测中排除或确认两种最重要的猪病病原，为早期预警和快速处置提供至关重要的技术支撑。

检测目标：

猪瘟病毒野毒株：特异性检测猪瘟病毒的野毒感染。这在与猪瘟疫苗免疫背景下的鉴别诊断中至关重要。

检测原理（双重荧光PCR法）：

该方法通过在一个反应管中设置两套独立的检测系统，实现高通量、高特异性的鉴别诊断。

DNA/RNA提取：这是一个关键步骤，因为ASFV是DNA病毒，而CSFV是RNA病毒。

需要对样品同时进行DNA和RNA的提取，或使用可共提的试剂盒。

对于CSFV的RNA，需要进行反转录步骤，将其转化为cDNA。

双重特异性扩增与检测：

CSFV-W检测系统：针对CSFV野毒株的特异性保守序列设计引物和探针，其探针通常用VIC或HEX标记。

ASFV检测系统：针对ASFV高度保守的基因序列设计引物和探针，并使用不同颜色的荧光染料标记，如FAM。

荧光信号释放与采集：

在PCR扩增过程中，DNA聚合酶分别水解与目标模板结合的探针，使报告荧光基团发出荧光。

实时区分与判定：

实时荧光PCR仪的不同光学通道会同步但独立地监测两种荧光信号的实时增长情况。

试剂盒典型组成：

PCR反应预混液：包含缓冲液、dNTPs、Mg2?等。

CSFV-W引物探针混合液。

ASFV引物探针混合液。

逆转录酶（用于将CSFV的RNA反转录成cDNA）。

Taq DNA聚合酶。

阳性对照：包含灭活的ASFV目标基因片段和CSFV-W目标基因片段的混合质粒或假病毒颗粒。

阴性对照：无核酸酶的超纯水。

操作流程详解说明：

样品处理与核酸共提：从临床样本中同时提取DNA和RNA。

反应体系配制：将上述所有组分与模板cDNA/DNA在同一反应管中混合。

双重荧光PCR扩增：将反应管置于荧光PCR仪中运行程序。

结果分析：

FAM通道有扩增：判定为ASFV阳性。

VIC/HEX通道有扩增：判定为CSFV-W阳性。

两个通道都有扩增，则判定为CSFV-W和ASFV混合感染。

 技术特点与优势

鉴别诊断能力极强：能明确区分CSFV野毒感染与疫苗免疫，同时排查是否存在更危险的ASFV感染。

主要应用场景：

生猪调运监管：在生猪运输前或到达后进行抽检，是防止疫情跨区域传播的关键技术。

注意事项

生物安全重中之重：检测此类高风险病原必须在相应生物安全级别的实验室进行，防止病毒泄漏。

核酸提取质量：同时高质量地提取DNA和RNA是成功检测的关键。

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