绵羊源性成分/内参基因(Ovine/18S)核酸检测试剂盒(双重荧光PCR法)

产品介绍：

绵羊源性成分/内参基因 (Ovine/18S) 核酸检测试剂盒 (双重荧光PCR法) 是一种专门用于检测食品、饲料或其他产品中是否含有绵羊源性成分的分子生物学工具。该试剂盒采用双重荧光PCR技术，能够在一个反应体系中同时检测绵羊特异性基因和作为内参的管家基因，从而实现对样本的定性鉴定和质量控制。

本试剂盒的核心原理是双重实时荧光定量PCR（qPCR），采用TaqMan探针法，通过两个不同荧光标记的探针，在同一反应管中同步扩增和检测两个目标序列。

检测靶标：

绵羊源性成分 (Ovine)：以绵羊特有的线粒体细胞色素b (cytb) 基因为靶标基因。该基因序列在绵羊中具有高度特异性，确保检测结果只反映绵羊成分的存在。

内参基因 (18S)：以真核生物中普遍存在的18S rRNA基因为内参。该基因作为内部对照，用于监控样本DNA提取质量、PCR反应体系是否正常，以及排除因抑制物存在导致的假阴性结果。

荧光标记与通道：

FAM通道：用于检测绵羊 (Ovine) 靶标基因，探针标记FAM荧光基团。

HEX/VIC通道：用于检测18S rRNA 内参基因，探针标记HEX或VIC荧光基团。

核心优势：

双重检测，结果可靠：同步检测目标基因和内参基因，既能确认样本中是否含有绵羊成分，又能验证整个检测流程的有效性，大大提高了结果的可信度。

高特异性：引物和探针针对绵羊特异性设计，与其他常见动物（如牛、猪、鸡等）的基因组DNA无交叉反应。

高灵敏度：检测限极低，最低检出限可达 1×10³ copies/mL，能够有效检出样本中微量的绵羊源性成分，适用于肉类掺假鉴定。

应用广泛：适用于肉制品真实性鉴定、饲料成分分析、法医物种鉴定及食品溯源等领

符合标准：检测方法符合欧盟法规（EC）No 1829/2003等国际食品检测标准。

规格与成分

一个完整的试剂盒通常包含以下组分：

市面上的试剂盒规格通常为 50次/盒 (50T)

一个完整的试剂盒通常包含以下组分：

组分名称  规格/描述  作用

qPCR预混液 (Master Mix)  50T x 2管  含Taq酶、dNTPs、反应缓冲液及UNG酶（防污染体系）

双重引物/探针混合液  50T x 1管  含FAM标记的cytb探针 + HEX标记的18S探针

阳性对照 (Positive Control)  50T x 1管  含绵羊目标基因片段的质粒或DNA，用于验证试剂盒性能

阴性对照 (Negative Control)  50T x 1管  无核酸酶水，用于监控反应体系是否存在污染

使用方法

标准操作流程如下：

样本采集与处理：

采集样本：采集待测的肉类组织、饲料、加工食品或其他含动物源性成分的样本。

处理方法：对样本进行均质化处理，以便于后续的DNA提取。

DNA提取：

使用商业化的基因组DNA提取试剂盒（如磁珠法或离心柱法）从处理后的样本中提取总DNA。

反应体系配置：

按说明书比例混合预混液、引物探针混合液。

分装至PCR反应管，每管加入提取的DNA模板（通常为5-10μL）。

上机扩增：

仪器设置：在ABI 7500、Roche LightCycler 480等荧光定量PCR仪上运行。

反应程序（参考）：

预变性：95℃ 2-5分钟

循环阶段（40-45个循环）：95℃ 10-15秒 → 60℃ 30-60秒（采集荧光）

结果判读：

绵羊成分阳性：FAM通道出现典型的“S”型扩增曲线，且Ct值 ≤ 阈值（如35-40）。

内参基因阳性：HEX/VIC通道出现典型的“S”型扩增曲线，表明DNA提取和PCR反应正常。

阴性结果：FAM通道无扩增曲线，或Ct值大于阈值。

无效结果：若内参基因（HEX/VIC通道）未扩增，则表明DNA提取失败或PCR体系存在抑制物，本次检测结果无效。

注意事项

保存条件：试剂盒需在 -20℃避光 条件下保存，有效期通常为12个月。避免反复冻融，尤其是酶制剂和阳性对照。

适用范围：该产品仅供科研或工业检测使用，不可用于临床诊断。

防污染：PCR实验极易受污染，必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯的枪头，防止扩增产物污染导致假阳性。

结果解读：阴性结果不能完全排除样本中不含绵羊成分，可能由于DNA提取失败、样本中抑制物干扰或绵羊成分含量低于检测限导致。必须结合内参基因的扩增情况对结果进行综合判断。

方法优势

相较于传统的细菌培养法（耗时长、生物安全要求极高）或血清学检测（窗口期长），荧光PCR法具有显著优势：

高特异性： 通过针对鼠疫杆菌特异性基因（如caf1、pla）设计的引物和探针，能够精准识别目标菌，有效区分近缘菌种（如假结核耶尔森氏菌），避免假阳性。

高灵敏度： 检测灵敏度极高（部分产品最低检测限可达1-10 CFU/mL或10-100拷贝/毫升），有助于在感染早期、菌血症含量较低或样本经过抗生素治疗后做出准确判断。

快速高效： 从样本DNA提取到出结果通常在数小时内完成，远快于传统培养法（通常需要数天），适合在突发公共卫生事件中对大量样本进行快速筛查。

安全便捷： 采用闭管检测模式，扩增后无需开盖处理，大大降低了扩增产物污染和操作人员接触高致病性病原体的风险。部分试剂盒采用预混冻干技术，便于试剂的储存和运输。

公司正在出售的产品：

质量控制与常见问题：

污染防控：

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯吸头。

实验后用10%次氯酸或紫外灯清洁工作台。

假阴性处理：

检查样本抑制物（如使用内标基因）。

试剂保存：

-20℃避光保存，避免反复冻融。