绵羊源性成分/内参基因(Ovine/18S)检测试剂盒(双重荧光PCR法) 新品

绵羊源性成分/内参基因(Ovine/18S)检测试剂盒(双重荧光PCR法)

一、 核心概述：这是什么？用来做什么？

产品名称： 绵羊源性成分/内参基因(Ovine/18S)检测试剂盒（双重荧光PCR法）

核心功能： 同时在一个反应管中检测两个目标基因：

绵羊源性成分 (Ovine)： 特异性靶标。用于鉴定样品中是否含有绵羊的DNA。

内参基因 (18S rRNA)： 质量控制标。用于确认整个检测过程（从DNA提取到PCR扩增）是否成功，避免因操作失误或样品中不含DNA而导致的“假阴性”结果。

方法原理： 双重荧光PCR法，即实时荧光定量PCR（qPCR）技术。通过在PCR反应体系中加入两种不同的荧光探针，实现对两个目标基因的同步、实时监测。

主要应用场景：

食品真伪鉴别： 检测肉制品、奶制品、保健品等是否掺有或冒充绵羊肉/羊奶，打击商业欺诈（如“挂羊头卖狗肉”）。

饲料安全监控： 确保反刍动物饲料中不含同源性的绵羊成分，预防疯牛病（BSE）等疾病的传播。

宗教食品认证： 如清真（Halal）认证，确保产品不含非允许的动物成分。

法医学鉴定： 对未知生物样本进行物种来源鉴定。

过敏原检测： 对绵羊成分过敏的人群，需要确认食品的安全性。

二、 技术原理详解：双重荧光PCR法如何工作

样本处理与DNA提取： 首先从待测样品（如肉糜、奶粉、饲料）中提取总DNA。DNA的质量和纯度直接影响检测结果。

PCR反应体系配制： 将提取的DNA模板与试剂盒内的以下成分混合：

PCR缓冲液： 提供最佳反应环境。

引物： 两对特异性引物。一对只与绵羊特有的DNA序列结合；另一对与高度保守的18S rRNA基因序列结合（该序列在绝大多数真核生物中都存在）。

探针： 两种带有不同荧光标记的TaqMan探针。

针对绵羊基因的探针： 通常标记FAM等绿色荧光染料。

针对内参基因的探针： 通常标记VIC/HEX等黄色或红色荧光染料。

Taq DNA聚合酶： 负责催化DNA扩增。

实时荧光PCR扩增与检测： 将反应管放入实时荧光PCR仪中进行循环扩增。

在每个循环的退火/延伸阶段，Taq酶会水解与目标DNA序列结合的探针，释放出荧光信号。

仪器实时监测两个不同荧光通道（如FAM通道和VIC通道）的信号强度。

随着PCR循环的进行，目标DNA片段呈指数级扩增，荧光信号也相应增强。当荧光信号超过预先设定的阈值（Threshold）时，所经历的循环数称为Ct值。

三、 试剂盒核心组分（示例）

一个典型的试剂盒通常包含：

Ovine-PCR反应液： 含有针对绵羊和内参基因的引物、探针、dNTPs等的预混液。

酶混合物： 包含热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照： 含有绵羊DNA的溶液，用于验证整个检测流程是否有效。

阴性对照： 不含DNA的溶液（如超纯水），用于确认试剂和环境中无污染。

四、 操作流程简要步骤

样本DNA提取。

配制反应体系： 按照说明书将各组分按比例混合分装到PCR管中。

加样： 分别加入待测样本DNA、阳性对照、阴性对照。

上机运行： 将PCR管放入仪器，设置好循环程序（通常包括预变性、40-45个循环的扩增）。

结果分析： 程序结束后，仪器软件会自动生成扩增曲线，并根据预设条件进行初步判读，最后由操作人员进行最终确认。

五、 技术优势与特点

高特异性： 引物和探针针对绵羊特有的基因序列设计，不与牛、猪、鸡等其他常见物种发生交叉反应。

高灵敏度： 可检测出样品中极微量的绵羊DNA（可达0.1%甚至更低）。

双重内标，可靠性强： 内参基因（18S）的引入有效避免了假阴性，确保结果准确可靠。

快速高效： 整个检测过程（从DNA提取到出结果）可在3-4小时内完成。

闭管检测，防污染： 加样后无需打开管盖，大大降低了扩增产物污染的风险。

定性准确： 结果直观（有/无），易于判读。

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