恶性疟原虫 / 间日疟原虫核酸检测试剂盒(双重荧光 PCR 法 ) 新品

产品介绍：

恶性疟原虫/间日疟原虫核酸检测试剂盒（双重荧光PCR法）是一种用于临床分子诊断的工具，专门设计用于同步检测和区分两种最主要的疟原虫：恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）和间日疟原虫（Plasmodium vivax）。

该试剂盒基于双重实时荧光定量PCR（Dual-color qPCR）技术，通过在一个反应体系中同时扩增两种病原体的特异性基因片段，实现“一管法”快速鉴别诊断，对于疟疾的精准治疗和流行病学监测具有重要意义。

疟疾是由疟原虫感染引起的严重寄生虫病，其中恶性疟原虫可导致重症疟疾，而间日疟原虫则可能引起复发。传统的镜检法依赖技术人员的经验，且在低原虫血症时易漏检。本试剂盒通过核酸检测，大大提高了检测的灵敏度和特异性。

检测原理：双重荧光探针法（TaqMan）。

在同一个PCR反应管中，同时加入两对特异性引物和两种不同荧光标记的探针，分别针对恶性疟原虫和间日疟原虫的保守基因序列。

FAM通道（通常对应恶性疟原虫）：靶向恶性疟原虫的环子孢子蛋白（CSP）基因或18s rRNA基因。

HEX/VIC通道（通常对应间日疟原虫）：靶向间日疟原虫的微线体蛋白（MSP-1）基因或线粒体基因。

预期用途：

临床诊断：用于发热门诊、急诊或感染科对疑似疟疾病人的快速确诊及虫种鉴定。

出入境检疫：对来自疟疾流行区的人员进行筛查。

消除监测：在疟疾消除地区进行主动监测和虫种溯源。

核心优势：

双重检测：一次反应同时检出两种主要疟原虫，还能发现混合感染。

高灵敏度：最低检测限可达 1×10³ copies/mL 或 100-500 拷贝/mL，显著高于显微镜镜检法（通常需>50-100 parasites/μL）。

快速高效：全程（含核酸提取）约需1.5-2小时，远快于培养法。

根据市场常见规格，该试剂盒通常为 50次/盒 (50T)

规格与成分

根据市场常见规格，该试剂盒通常为 50次/盒 (50T)

试剂盒通常包含以下组分：

组分名称  规格/描述  作用

qPCR预混液 (Master Mix)  50T x 2管  含Taq酶、dNTPs、缓冲液及UNG酶（防污染）

双重引物/探针混合液  50T x 1管  含FAM标记的恶性疟探针 + HEX标记的间日疟探针

阳性对照 (Positive Control)  50T x 1管  含两种疟原虫目标片段的质粒混合物，用于验证体系有效性

阴性对照 (Negative Control)  50T x 1管  无核酸酶水，用于监控污染

核酸提取试剂 (部分含)  可选  用于从全血样本中提取基因组DNA

使用方法

标准操作流程如下：

样本采集与处理：

采集受试者静脉全血（EDTA抗凝）或滤纸干血斑。

若使用干血斑，需打孔取样；若使用全血，需进行DNA提取。

核酸提取：

使用磁珠法或离心柱法试剂盒提取样本中的基因组DNA。建议使用内标质控提取效率。

反应体系配置：

按说明书比例混合预混液、引物探针混合液。

分装至PCR反应管，每管加入提取的DNA模板（通常为5μL）。

上机扩增：

仪器设置：在ABI 7500、Roche LightCycler 480等荧光定量PCR仪上运行。

反应程序（参考）：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40-45个循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒

结果判读：

恶性疟原虫阳性：FAM通道出现“S”型扩增曲线，且Ct值 ≤ 阈值（如35-38）。

间日疟原虫阳性：HEX/VIC通道出现“S”型扩增曲线，且Ct值 ≤ 阈值。

混合感染：FAM和HEX两个通道均出现阳性扩增曲线。

阴性：两个通道均无扩增曲线或Ct值为“Undet”。

注意事项

保存条件：试剂盒需在 -20℃避光 条件下保存，有效期通常为12个月。避免反复冻融，尤其是酶制剂。

适用范围：该产品仅供体外诊断使用，仅作为临床辅助诊断工具，不能替代临床诊断。确诊需结合流行病学史、临床症状及镜检结果综合判断。

生物安全：全血样本视为具有潜在传染性，操作时需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行，穿戴防护装备。

防污染：由于PCR灵敏度极高，必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头，防止气溶胶污染导致假阳性。

方法优势

相较于传统的细菌培养法（耗时长、生物安全要求极高）或血清学检测（窗口期长），荧光PCR法具有显著优势：

高特异性： 通过针对鼠疫杆菌特异性基因（如caf1、pla）设计的引物和探针，能够精准识别目标菌，有效区分近缘菌种（如假结核耶尔森氏菌），避免假阳性。

高灵敏度： 检测灵敏度极高（部分产品最低检测限可达1-10 CFU/mL或10-100拷贝/毫升），有助于在感染早期、菌血症含量较低或样本经过抗生素治疗后做出准确判断。

快速高效： 从样本DNA提取到出结果通常在数小时内完成，远快于传统培养法（通常需要数天），适合在突发公共卫生事件中对大量样本进行快速筛查。

安全便捷： 采用闭管检测模式，扩增后无需开盖处理，大大降低了扩增产物污染和操作人员接触高致病性病原体的风险。部分试剂盒采用预混冻干技术，便于试剂的储存和运输。

公司正在出售的产品：

质量控制与常见问题：

污染防控：

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯吸头。

实验后用10%次氯酸或紫外灯清洁工作台。

假阴性处理：

检查样本抑制物（如使用内标基因）。

试剂保存：

-20℃避光保存，避免反复冻融。