还原型谷胱甘肽（GSH）测试盒

商品属性

测定意义与原理

测定意义

还原型谷胱甘肽（GSH）是细胞内最重要的抗氧化剂之一，主要功能包括：抗氧化防御：清除自由基，保护细胞免受氧化损伤解毒作用：与有毒物质结合，促进其排出体外维持氧化还原平衡：参与细胞内氧化还原状态的调节疾病关联：GSH水平降低与衰老、癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等密切相关药物研发：作为评价药物抗氧化作用和毒性的重要指标

测定原理（DTNB显色法）

采用Ellman试剂（DTNB，5,5'-二硫代双-2-硝基苯甲酸）检测GSH含量，反应式如下： GSH+DTNB→GSSG+TNBGSH+DTNB→GSSG+TNB DTNB与GSH反应生成黄色的TNB（2-硝基-5-巯基苯甲酸），TNB在412nm处有特征吸收峰，吸光度与GSH浓度成正比。

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂一 50mL×1瓶/100mL×1瓶 含缓冲液、EDTA、表面活性剂等，用于样本提取和反应体系构建

试剂二 10mL×1瓶/20mL×1瓶 含DTNB，GSH显色试剂

试剂三 10mL×1瓶/20mL×1瓶 含GSSG还原酶、NADPH，用于总谷胱甘肽（GSSG+GSH）检测

GSH标准品 1×10mg 用于建立标准曲线，校准仪器

提取液 100mL×1瓶 用于样本前处理，提取细胞内GSH

自备仪器与试剂

必备仪器

可见分光光度计/酶标仪（412nm检测通道）

台式高速离心机（≥12000g）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）

超声破碎仪（用于细胞/细菌样本）

必备耗材

1mL比色皿/96孔板

离心管（1.5mL、10mL）

一次性无菌吸头

研钵/组织匀浆器（冰浴专用）

自备试剂

蒸馏水/去离子水

生理盐水（0.85% NaCl）

液氮（用于样本速冻）

三氯乙酸（TCA，用于蛋白沉淀）

样本前处理方法

动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆加入0.2mL 50% TCA，混匀后冰浴静置10min12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若GSH浓度过高，可用提取液稀释1-5倍后测定

细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清加入1mL预冷提取液重悬，冰浴超声破碎（功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）加入0.2mL 50% TCA，混匀后冰浴静置10min12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测

血清/血浆样本血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取血清上清血浆样本：加入抗凝剂（肝素/EDTA）后3000g 4℃离心10min，取上清样本可直接检测，无需提取处理；浓度过高时可用生理盐水稀释

测定操作步骤

可见分光光度法操作

标准曲线建立：

稀释GSH标准品至不同浓度（0、10、20、40、80、160μmol/L）

取比色皿，依次加入：试剂一 900μL + 标准品/样本 100μL + 试剂二 100μL

混合均匀，37℃避光反应10min

用蒸馏水调零，在412nm处读取吸光度值

以GSH浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线

GSH含量测定：

取比色皿，依次加入：试剂一 900μL + 样本 100μL + 试剂二 100μL

混合均匀，37℃避光反应10min

在412nm处读取吸光度值，根据标准曲线计算GSH浓度

总谷胱甘肽（T-GSH）测定：

取比色皿，依次加入：试剂一 900μL + 样本 100μL + 试剂三 100μL

混合均匀，37℃反应30min

加入试剂二 100μL，37℃避光反应10min

在412nm处读取吸光度值，根据标准曲线计算T-GSH浓度

氧化型谷胱甘肽（GSSG）= (T-GSH - GSH)/2

微量法（酶标仪）操作96孔板每孔加入：试剂一 90μL + 标准品/样本 10μL + 试剂二 10μL37℃避光反应10min用酶标仪读取412nm处吸光度值以GSH浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线根据样本吸光度值，从标准曲线上计算GSH浓度

含量计算方法

单位定义

μmol/g鲜重：每g组织鲜重中GSH的微摩尔数

μmol/L：每升血清/血浆中GSH的微摩尔数

μmol/mgprot：每mg组织蛋白中GSH的微摩尔数

μmol/10⁶cell：每100万个细胞中GSH的微摩尔数

计算公式

GSH含量(μmol/g鲜重)=C×V样总×NW×V样测GSH含量(μmol/g鲜重)=W×V样测C×V样总×N

C：从标准曲线上查得的GSH浓度（μmol/L）

V样总：样本提取液总体积（L）

N：稀释倍数

W：组织鲜重（g）

V样测：测定时加入样本体积（L）

简化公式

组织样本：GSH（μmol/g鲜重）= C × V样总 × N ÷ W

液体样本：GSH（μmol/L）= C × N

蛋白样本：GSH（μmol/mgprot）= C × V样总 × N ÷ (Cpr × V样测 × 1000)

性能指标

指标 要求

线性范围 0~200μmol/L，线性相关系数r≥0.995

检测下限 ≤0.5μmol/L

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

回收率 90%~110%

稳定性 4℃保存12个月，活性保留率≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免GSH氧化；-80℃可保存1个月

匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃

避免样本接触金属离子，可用EDTA螯合

试剂使用：

DTNB溶液对光敏感，配制后需避光保存

NADPH溶液需现配现用，避免氧化

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应时间需严格控制，避免显色过度或不足

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

每个样本需设置3个平行孔，取平均值计算

质量控制：

每次实验需设置空白对照和标准曲线

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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