类鼻疽伯克霍尔德菌(BP)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

产品介绍：

类鼻疽是一种被世界卫生组织（WHO）重点关注的人畜共患病，主要流行于东南亚和澳大利亚北部。由于其临床表现多样且培养周期长，基于荧光PCR的核酸检测是目前快速诊断、早期干预的关键手段。

以下是该试剂盒的详细技术解析和应用说明：

1. 核心检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法（实时荧光定量PCR）。

靶点基因： 为了确保特异性，试剂盒通常针对类鼻疽伯克霍尔德菌的特异性基因设计引物和探针。常用的靶基因包括：

TTS1（III型分泌系统基因）： 与致病性相关，特异性高。

BPSS0745（种特异性保守序列）： 种属特异性好。

orf2 或 orf11： 也是常用的特异性检测靶点。

检测机制： 提取样本DNA后，通过PCR扩增。若样本中含有BP的DNA，探针被切割释放荧光信号（通常为FAM通道），仪器实时监测并判断结果。

2. 试剂盒的关键性能指标

高特异性： 能特异性检测类鼻疽伯克霍尔德菌，不与鼻疽伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌等近缘菌种发生交叉反应。

高灵敏度： 检测下限通常可达 10³ copies/mL 或 10³ CFU/mL，显著高于传统培养法的灵敏度。

检测时间： 全程（含核酸提取）约 1.5 - 2小时，远快于培养法的24-48小时。

3. 试剂盒组成（典型配置）

一个标准的50T试剂盒通常包含以下组分：

组分名称  作用  保存条件

PCR反应液  含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液、引物/探针  -20℃ 保存

DNA聚合酶  含Taq酶  -20℃ 保存

阳性对照  含BP靶基因的质粒或灭活菌液  -20℃ 保存

阴性对照  无核酸酶水  2-8℃ 保存

适用样本类型

临床样本： 血液、痰液、气管分泌物、尿液、伤口分泌物等。

环境样本： 土壤、水体（用于流行病学调查或环境监测）。

5. 结果判读标准（参考）

阳性（+）： FAM通道出现典型的S型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35-38（具体阈值依厂家说明书而定），表明样本中存在类鼻疽伯克霍尔德菌核酸。

阴性（-）： 无Ct值，或Ct值 > 38/。

可疑（±）： Ct值在临界值附近，建议复检或结合培养结果判断。

临床与应用意义

早期诊断： 类鼻疽症状（如肺炎、败血症）缺乏特异性，PCR检测能快速提供病原学证据，指导使用头孢他啶等特效抗生素。

生物安全： 类鼻疽伯克霍尔德菌属于生物安全三级（BSL-3）病原体，直接检测临床样本比培养更安全，减少了操作人员暴露的风险。

环境监测： 适用于疫区土壤和水源的筛查。

特别提示

假阴性风险： 如果样本中细菌浓度极低（低于检测下限）或DNA提取效率低，可能出现假阴性。建议结合血清学检测（如间接血凝试验IHA）提高检出率。

操作规范： 由于该菌致病性强，操作临床样本时务必严格遵守生物安全二级（BSL-2）或以上防护规范。

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通用操作流程与注意事项：

1. 样本制备

使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA，需设置阳性、阴性对照。

关键点：避免交叉污染，阳性对照单独存放。

2. 反应体系配置

常规PCR：引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。

qPCR：需额外加入探针或染料。

3. 扩增程序

常规PCR：

预变性→循环扩增→延伸

qPCR：

预变性→循环扩增（荧光采集）

4. 结果判读

常规PCR：电泳观察条带大小（如阳性对照需出现预期条带）。

qPCR：Ct值≤35为阳性，阴性对照无信号。