犬利什曼原虫探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于犬利什曼原虫核酸的定性与定量检测。适用于科研用途（不可用于临床诊断），具有高灵敏性、高特异性及宽线性范围（覆盖5个数量级）。

规格与成分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 犬利什曼原虫引物混合液 | 100 μL |

| 试剂五 | 犬利什曼原虫探针 | 50 μL |

| 试剂六 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）| 50 μL |

| 其他 | 说明书 | 1份 |

反应次数：50次（20 μL体系/次）。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温泡沫箱加冰密封运输，阳性对照需单独放置以防污染。

自备试剂

样品RNA提取试剂（兼容柱式病毒RNA提取试剂盒或自选纯化方法）。

实验步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管（7至2号），每管加45 μL稀释液。

依次从7号管（1×10⁷拷贝/μL）稀释至2号管（1×10²拷贝/μL），冰上保存备用。

2. 样品RNA制备

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），使用1000倍稀释阳性对照作为制备对照（PC），水作为阴性对照（NC）。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

加样表：

| 成分 | 样品管（N+2） | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样品RNA/标准品/水 | 5 μL | 5 μL水 | 5 μL标准品 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样品浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36且有扩增曲线。

样品Ct≤36为阳性；≥40为阴性；36-40需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、加样），避免交叉污染。

使用带芯枪头，所有试剂使用前短暂离心混匀。

实验后工作台需用10%次氯酸或75%酒精消毒。

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