人视网膜微血管内皮细胞 新品

细胞简介：

人视网膜微血管内皮分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力强。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在视网膜血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。由于从不同的组织和器官获得的内皮细胞具有不同的特性，在脑和视网膜中，这些内皮细胞具有内屏障的功能，在调节血管生理状态，释放血管活性物质以及新生血管的形成中发挥着重要作用，体外分离培养RCEC对研究视网膜血管性疾病发生发展的病理生理机制以及疾病的早期防治具有重要临床意义。

产品信息:

产品名称 人视网膜微血管内皮细胞

组织来源 视网膜组织

默认种属 人

产品规格 5×10^5Cells/T25

方法简介 公司实验室分离的人视网膜微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测 公司实验室分离的人视网膜微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人视网膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养步骤：

组织块培养法

取材与剪切

在无菌条件下取出组织，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、结缔组织等非目标成分。

用眼科剪将组织剪切成 0.5-1 mm³ 的小块。

接种

用吸管将组织块均匀地贴附在培养皿或培养瓶的内表面，各组织块之间保持一定间距（约0.5 cm）。

吸去多余液体，将培养器皿翻转，放入 37℃、5% CO₂ 的培养箱中，静置 1-3小时，让组织块牢固贴壁。

加液培养

待组织块贴壁后，轻轻翻转培养瓶，从一侧缓慢加入足量的培养液，使组织块浸没在液体中，注意不要让液体直接冲击组织块，以免冲起。

继续在培养箱中静置培养。通常 3-5天 后可观察到细胞从组织块边缘长出。

公司正在出售的产品：

无菌操作是生命线：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌进行，使用专用试剂和耗材，防止交叉污染。

消化是关键步骤：

控制时间：使用胰蛋白酶或TrypLE Express消化时，严格控制在1-2分钟内。显微镜下观察到细胞变圆、边缘松动即可终止，避免过度消化导致细胞损伤。

消化液选择：部分供应商推荐使用0.25%胰蛋白酶，也有使用TrypLE Express或0.25% EDTA胰酶的，可根据实验室条件和细胞反应选择。

培养基与生长因子：

基础培养基：推荐使用专用培养基（如EGM-2 MV BulletKit）。若使用DMEM/F12等基础培养基，需补充10-20%胎牛血清（FBS）及抗生素（如青霉素/链霉素）。

生长因子：为促进生长，可添加VEGF、FGF等内皮细胞生长因子。传代后可尝试对比培养（一瓶用原装完全培养基，一瓶用自配培养基）。

细胞密度与传代：

最佳传代密度：建议在细胞汇合度达70%-80%时进行传代，避免过度生长导致细胞状态下降。

生长不均处理：若细胞生长不均，成岛状分布，可将细胞消化后重新打散，加入新鲜培养基培养]^。

污染监测与处理：

定期检查：定期观察细胞有无支原体、细菌等污染迹象。

污染处理：若发现污染，需根据污染程度决定。轻度污染可尝试用含高浓度抗生素的培养液反复清洗，但严重污染时建议弃置细胞。