人真皮成纤维细胞

细胞简介：

人真皮成纤维分离自真皮组织；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的真皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。真皮成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

产品信息:

产品名称 人真皮成纤维细胞

组织来源 皮肤组织

默认种属 人

产品规格 5×10^5Cells/T25

方法简介 公司实验室分离的人真皮成纤维采用先消化、后-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测 公司实验室分离的人真皮成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人真皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养步骤：

组织块培养法

取材与剪切

在无菌条件下取出组织，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、结缔组织等非目标成分。

用眼科剪将组织剪切成 0.5-1 mm³ 的小块。

接种

用吸管将组织块均匀地贴附在培养皿或培养瓶的内表面，各组织块之间保持一定间距（约0.5 cm）。

吸去多余液体，将培养器皿翻转，放入 37℃、5% CO₂ 的培养箱中，静置 1-3小时，让组织块牢固贴壁。

加液培养

待组织块贴壁后，轻轻翻转培养瓶，从一侧缓慢加入足量的培养液，使组织块浸没在液体中，注意不要让液体直接冲击组织块，以免冲起。

继续在培养箱中静置培养。通常 3-5天 后可观察到细胞从组织块边缘长出。

公司正在出售的产品：

无菌操作是生命线：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌进行，使用专用试剂和耗材，防止交叉污染。

消化是关键步骤：

控制时间：使用胰蛋白酶或TrypLE Express消化时，严格控制在1-2分钟内。显微镜下观察到细胞变圆、边缘松动即可终止，避免过度消化导致细胞损伤。

消化液选择：部分供应商推荐使用0.25%胰蛋白酶，也有使用TrypLE Express或0.25% EDTA胰酶的，可根据实验室条件和细胞反应选择。

培养基与生长因子：

基础培养基：推荐使用专用培养基（如EGM-2 MV BulletKit）。若使用DMEM/F12等基础培养基，需补充10-20%胎牛血清（FBS）及抗生素（如青霉素/链霉素）。

生长因子：为促进生长，可添加VEGF、FGF等内皮细胞生长因子。传代后可尝试对比培养（一瓶用原装完全培养基，一瓶用自配培养基）。

细胞密度与传代：

最佳传代密度：建议在细胞汇合度达70%-80%时进行传代，避免过度生长导致细胞状态下降。

生长不均处理：若细胞生长不均，成岛状分布，可将细胞消化后重新打散，加入新鲜培养基培养]^。

污染监测与处理：

定期检查：定期观察细胞有无支原体、细菌等污染迹象。

污染处理：若发现污染，需根据污染程度决定。轻度污染可尝试用含高浓度抗生素的培养液反复清洗，但严重污染时建议弃置细胞。