猪生殖与呼吸综合症病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法，适用于猪生殖与呼吸综合症病毒（包括美洲型经典株、高致病性变异株及类NADC-30株）RNA的定性检测，为PRRSV感染的科研辅助诊断提供参考，不可用于临床治疗或诊断。

技术特点

高灵敏度：引物针对病毒保守区域设计，检测限低至10^2拷贝/μL。

广谱性：可检测PRRSV美洲型经典株、高致病株及类NADC-30株。

快速便捷：采用一步法RT-PCR，反应时间缩短至90分钟内。

防污染设计：含dUTP/UNG酶体系，降低假阳性风险。

稳定性：-20℃避光保存有效期12个月，反复冻融≤7次。

组分清单

RT-PCR反应液（含SYBR Green染料、dNTPs、缓冲液）

逆转录酶/热启动Taq酶混合液

阳性对照（人工合成RNA标准品）

阴性对照（DEPC水）

使用说明书

操作流程

1. 样本处理

使用商品化RNA提取试剂盒提取样本RNA，建议-70℃保存备用。

2. 反应体系配制（20μL/管）

| 组分 | 体积 |

| RT-PCR反应液 | 19μL |

| 酶混合液 | 1μL |

| 样本RNA | 5μL |

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 15min | 1 |

| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15s | 40 |

| | 60℃ | 30s | |

| 熔解曲线 | 95℃→60℃| 按仪器要求设置 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线峰值与阳性对照一致。

可疑：35<Ct值<40，建议重复检测。

阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。

注意事项

实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需与样本分开存放，防止气溶胶污染。

熔解曲线分析需排除引物二聚体干扰。

储存与运输

-20℃避光保存，运输需干冰条件。

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