基本描述
产品名称：分散酶Ⅱ
规格或纯度：无动物源,生物活性,ActiBioPure™,天然,高性能,无支原体,EnzymoPure™,来源于多粘芽孢杆菌; 300-360 PU/mg enzyme powder
产品介绍：
组织培养用酶 Dispase 是切断肽链的中性及非极性氨基酸 N 端的金属蛋白酶，能够把上皮细胞从组织上剥离成片状，长期以来用于原代培养的细胞分离与分散，近年来也被应用于再生医疗领域。与胰蛋白酶和胶原酶等蛋白酶的作用不同，Dispase 造成的细胞损伤更少，可温和地分散细胞，因此在 ES 和 iPS 细胞等新兴领域中被应用于细胞的分散和传代。
产品信息
| 项目号 | D1516119
| D1516122
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| 品名 | 分散酶Ⅰ
| 分散酶Ⅱ
| | 包装 | 结晶酶，无菌产品
| 粉末酶，非无菌产品
| | 酶活性 | 10,000–13,000 PU/vial
| 300-360 PU/mg enzyme powder
| | 添加剂等 | 含有醋酸钙 | 含有糊精和醋酸钙 | | 储存方法及有效期 | 生产后在 2～8℃下可储存 2 年（未开封）；开封溶解后请冻存在 - 20℃以下，并在 6 个月内使用。 | 生产后在 2～8℃下可储存 2 年（未开封）；开封溶解后请冻存在 - 20℃以下，并在 6 个月内使用 |
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主要特点
- Dispase 是 Paenibacillus sp. (旧名：Bacillus polymyxa) 来源的中性金属蛋白酶，活性中心含有 Zn²⁺，并使用 Ca²⁺稳定其活性。
- 酶活性几乎不受血清影响，无论有无血清均可使用。添加 EDTA 等螯合剂、使用新鲜培养基或缓冲液清洗细胞即可停止酶促反应 。
- 可以很好地分解组成基底膜的 Ⅳ 型胶原、纤连蛋白，使上皮细胞从组织上剥离成片状。
- 与胰蛋白酶、胶原酶等蛋白酶的作用不同，细胞损伤少，可温和地分散细胞。
- 作用条件范围广泛，可以在不同的浓度、处理时间、温度以及 pH 条件下起作用。
- 在一般细胞培养温度 (37℃) 下非常稳定，对于部分类型细胞，添加本产品至培养基可实现悬浮培养 。
- 本产品无动物源成分，不含支原体。
使用方法
分散酶Ⅰ ：需在无菌条件下溶解制备。打开铝盖，用消毒乙醇对瓶塞及其周围区域进行消毒，使用已灭菌的注射器吸取所需量的培养基或缓冲液，注入瓶中进行溶解。铝盖容易划伤手指，操作时请注意安全。
分散酶Ⅱ：称量所需量的分散酶Ⅱ粉末，使用培养基或缓冲液溶解。在洁净环境下进行 0.2 μm 过滤灭菌。
作用条件
| 酶浓度 | 100 ~ 2000 PU/mL | | 溶解缓冲液 | 含有 Ca²⁺的缓冲液或者培养基（可含血清）
| | 反应时间 | 30 min ~ 几天 | | 反应温度 | 室温～37℃ | | 反应 pH | 6.5 ~ 9.0 | | 抑制剂 | EDTA、Fe³+、Fe²+、Ni²+、Cu²+、Al³+、Zn²+
* 本酶的活性中心含有 Zn²⁺，如反应溶液中含有过量的 Zn²⁺，则酶活性可能受到抑制 |
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活性检测法
将 1 mL 酶溶液 (50 PU/mL，含 2 mM 醋酸钙的 50 mM Tris-HCl 缓冲液) 添加到 5 mL 0.6% 酪蛋白水溶液 (pH 7.5，含 2 mM 醋酸钙的 50 mM Tris-HCl 缓冲液) 中，在 30℃下反应 10 min。反应结束后，加入 5 mL 三氯乙酸试剂终止反应。在 30℃下静置 30 min 并进行过滤后，检测 275 nm 吸光度。
在此条件下，1 PU (Protease Unit) 定义为 1 min 内水解酪蛋白产生相当于 1 μg 酪氨酸的酶量。(活性单位 (PU) 指 Protease Unit)
注）三氯乙酸试剂：使用蒸馏水溶解无水醋酸钠 1.8%(w/v)、三氯乙酸 1.8%(w/v)、醋酸 1.98%(w/v) 后，将 pH 调整到 4.0 后得到的试剂。
使用注意事项
1. 本产品为研究用试剂，请勿将本产品用于人或动物的活体实验以及诊断用途。
2. 本产品为分散酶，接触到眼睛、口腔、皮肤或粘膜等部位可能引起炎症。如不慎直接接触，请立即用大量流水进行冲洗，必要时尽快就医。
3. 本产品为保证酶稳定性，成分中含有醋酸钙。因此本产品在高浓度的磷酸缓冲液中使用时会产生白色沉淀 (钙盐)，酶活性和酶稳定性可能下降。
4. 对于酶溶液和作用条件，推荐使用含有胎牛血清的培养基，有利于分散以及分散后的细胞增殖。
5. 打开铝盖时容易划伤手指，操作时请注意安全。
6. 请将本产品置于规定的储存条件下进行储存，请勿使用过期产品。
7. 请将 Dispase 溶液于 - 20℃下冷冻储存，并在 6 个月内使用完毕。
8. 废弃本产品时，请遵守废弃物处理的相关条例，妥善处理。
Q&A
1. 关于 Dispase Ⅰ 和 Dispase Ⅱ
Q1： Dispase Ⅰ 和 Dispase Ⅱ的区别？
A1：
Dispase Ⅰ：结晶酶，无菌，含醋酸钙；
Dispase Ⅱ：粉末状酶，非无菌，含糊精和醋酸钙（溶解后根据需求进行过滤灭菌）。
※ Ⅰ和Ⅱ的纯化程度略有不同（Ⅰ的纯化程度更高）。
Q2：Dispase Ⅰ 和 Dispase Ⅱ 在使用时有哪些注意事项？是否适用于不同的实验体系？
A2：可用于多种细胞类型和实验体系，目前尚未有不适用的实验体系情况反馈。需注意，因包装不同，开封后应根据存储条件决定如何使用产品。
Dispase Ⅰ：真空密封，基本上需一次性使用完毕；
Dispase Ⅱ：粉末分装使用。
2. 关于使用方法
Q1：推荐浓度是多少？
A1：推荐浓度如产品说明书所示：100～2,000 PU/mL。建议可先在该浓度范围内摸索合适的浓度。
Q2：将上皮细胞剥离至薄片时的推荐浓度为？
A2：酶的效果取决于细胞类型和培养条件，对此无法提供明确的推荐浓度。请参考产品说明书中的浓度100-2000 PU/mL，摸索合适的使用浓度。此外，浓度相同时， DispaseⅠ 和 Dispase Ⅱ在使用上没有明显差异。
Q3：酶活性、稳定性与Ca²⁺相关，那在不含Ca²⁺的PBS（-）或 HBSS中是否还能发挥作用？
A3：如产品说明书所述，在磷酸盐缓冲溶液中使用时，可能出现白色沉淀或酶活性、稳定性会降低。因此，需尽量避免使用磷酸盐缓冲溶液，建议在含有Ca²⁺条件下使用该产品。
Q4：可以使用PBS (-)吗？
A4：可以使用，但酶活性和稳定性可能会降低。请调整酶添加量（酶浓度）并在溶解后立即使用。
Q5：使用时Ca²⁺的推荐浓度是多少？
A5：仅需几mM即可充分发挥作用。
Q6：前面提到使用含钙的缓冲液或培养基作为酶的溶解液，如果使用含胎牛血清（FBS）的培养基，浓度是否可以调整为10%？
A6：可以。
3. 关于作用
Q1：除了可分解IV 型胶原蛋白和纤连蛋白外，是否还可分解其他的基底膜蛋白？
A1：对层粘连蛋白有轻微的分解作用。
Q2：经过 Dispase 散酶处理后是否会对细胞存活率或细胞基因造成影响？
A2：细胞存活率因条件不同会有较大差异。 而对基因的影响尚未得到证实。
N-末端序列：1 PU定义为1 min内水解酪蛋白产生相当于1 μg 酪氨酸的酶量。（活性单位（PU）指Protease Unit）
无动物源：Yes
级别：无动物源, 生物活性, ActiBioPure™, 天然, 高性能, 无支原体, EnzymoPure™
产品规格参数
浓度：来源于多粘芽孢杆菌; 300-360 PU/mg enzyme powder
复溶：Reconstitute in buffer or medium containing Ca²⁺ (serum may be included).
储存温度：2-8°C储存
运输条件：低温运输
稳定性与储存：未开封长期储存2-8℃（24个月）；复溶后建议分装，-20℃储存（6个月）。
CAS编号和信息：42613-33-2
功能和特点
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