肠炎沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

肠炎沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议不超过5次），有效期12个月。

适用样本：气管分泌物拭子、肺组织等临床样本，或其他含肠炎沙门氏菌DNA的样本。

检测原理

采用染料法实时荧光定量PCR技术（SYBR Green等非探针类荧光染料），通过特异性引物扩增肠炎沙门氏菌靶基因序列，荧光信号随扩增产物积累实时增强，结合标准曲线实现对目标DNA的定性与定量分析。

试剂盒组分（以实际包装为准）

PCR反应混合液：含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液等。

热启动Taq DNA聚合酶。

肠炎沙门氏菌特异性引物对。

阳性对照（肠炎沙门氏菌标准品DNA）。

阴性对照（无核酸酶水）。

实验步骤

样本处理：

提取样本DNA（推荐柱提法或试剂盒法），确保纯度（A260/A280≈1.8-2.0）。

若样本为RNA，需先逆转录为cDNA。

反应体系配制（以50μl为例）：

10× PCR Buffer：5μl

dNTP Mix（2mM）：4μl

引物1（10μM）：2μl

引物2（10μM）：2μl

Taq酶（2U/μl）：1μl

DNA模板：1μl（50ng-1μg）

加ddH₂O至50μl。

PCR扩增程序：

预变性：93℃ 3-5分钟；

循环扩增（30-35次）：93℃ 40秒 → 58℃ 30秒 → 72℃ 60秒；

终延伸：72℃ 7分钟。

数据分析：

使用配套软件（如ABI、Bio-Rad等仪器软件）分析Ct值，通过标准曲线计算拷贝数。

注意事项

样本要求：避免DNA降解，液氮或-80℃保存；若使用Trizol保存，需按规范提取。

污染控制：分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），使用无核酸酶耗材。

仪器兼容性：适用于ABI、LightCycler、Bio-Rad等主流荧光定量PCR仪。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μl的靶序列。

特异性：不与其他沙门氏菌亚型或常见病原体交叉反应。

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