人Vitamin D binding proteinelisa试剂盒

人Vitamin D binding proteinelisa试剂盒

产品简介:

人维生素D结合蛋白（Vitamin D Binding Protein, DBP）ELISA试剂盒用于定量检测人体样本（如血清、血浆等）中的DBP水平。DBP是一种多功能糖蛋白，主要由肝脏合成，负责运输维生素D及其代谢物（如25-羟基维生素D和1,25-二羟基维生素D），在维持钙磷代谢、骨骼健康及免疫调节中发挥重要作用。

检测原理

双抗体夹心法ELISA：微孔板预包被抗人DBP抗体，样本中的DBP与生物素标记的检测抗体结合，再与HRP标记的链霉亲和素反应，加入TMB底物后显色，颜色深浅与DBP浓度呈正相关，酶标仪在450 nm波长处读数。

主要组成

预包被酶标板（96/48孔）

DBP标准品（多个浓度梯度）

生物素化检测抗体

HRP标记链霉亲和素

底物溶液（TMB）、终止液（硫酸）

洗涤缓冲液、样本稀释液、封板膜等辅助试剂

检测流程

加样：标准品/样本+生物素化检测抗体+HRP标记链霉亲和素

洗涤：每孔加满洗涤液，重复5次

显色：加入底物溶液，避光反应10-15分钟

终止：加入终止液

读数：酶标仪450 nm波长测定OD值

性能指标

检测范围：通常为0.3125-20 ng/mL（具体以说明书为准）

灵敏度：最小可检测浓度小于0.078 ng/mL

特异性：仅与人类DBP反应，不与其他蛋白显著交叉反应

重复性：板内变异系数≤10%，板间变异系数≤15%

临床与研究意义

维生素D代谢研究：DBP水平影响维生素D的转运和生物利用度，检测DBP有助于评估维生素D缺乏或过量的机制。

肾脏疾病研究：DBP在肾小球滤过和肾小管重吸收中发挥作用，尿液中DBP水平变化可反映肾小管损伤（如IgA肾病）

免疫相关疾病研究：DBP参与免疫调节，其水平变化与系统性红斑狼疮、糖尿病等疾病相关，检测DBP可为疾病机制研究提供线索。

样本要求

血清/血浆：避免溶血和反复冻融。

其他样本：如细胞培养上清、组织匀浆，需经适当处理和稀释。

注意事项

试剂盒需2-8℃保存，有效期一般为6个月。

实验前平衡至室温，严格按照说明书操作。

建议设空白对照、标准曲线和样本复孔，确保结果准确可靠。

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。