人OPG/TNFRSF11Belisa试剂盒 新品

人OPG/TNFRSF11Belisa试剂盒

产品简介:

1. 试剂盒基本信息

检测目标：人骨保护素（Osteoprotegerin, OPG/TNFRSF11B），一种可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员，参与骨代谢和免疫调节

检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、骨组织匀浆等

灵敏度：通常<15 pg/mL（不同品牌有差异）

检测范围：31.25-2000 pg/mL（部分试剂盒可扩展至15.6-4000 pg/mL）

特异性：仅检测天然或重组人OPG，不与RANKL或其他TNF受体家族成员交叉反应

2. 试剂盒组成（96T）

组分  规格  储存条件

预包被抗OPG抗体微孔板  96孔  2-8℃

重组人OPG标准品  冻干粉（0、31.25、62.5、125、250、500、1000、2000 pg/mL）  -20℃

生物素标记抗OPG检测抗体  120 μL  -20℃

HRP标记链霉亲和素  120 μL  -20℃

TMB显色液  10 mL  4℃（避光）

终止液（1M H?SO?）  10 mL  室温

洗涤缓冲液（20×）  50 mL  室温

样本稀释液  20 mL  2-8℃

封板膜  2张  室温

3. 检测原理

抗原捕获：样本中OPG与预包被抗体结合

信号放大：生物素标记二抗与OPG结合

酶催化显色：HRP-链霉亲和素催化TMB显色

定量分析：450nm测OD值，浓度与吸光度成正比

4. 操作流程

标准品复溶及梯度稀释

加样100μL/孔，37℃孵育2小时

洗涤5次

加检测抗体100μL/孔，37℃1小时

加酶结合物100μL/孔，37℃30分钟

TMB显色15分钟（避光）

终止反应，30分钟内检测

5. 数据分析

使用四参数logistic曲线拟合

复孔CV应<10%

超出范围样本需调整稀释比例复测

6. 应用领域

骨代谢疾病：骨质疏松、Paget's病、骨转移瘤研究

心血管疾病：血管钙化机制研究

免疫调节：类风湿性关节炎等自身免疫病

肿瘤研究：多发性骨髓瘤、乳腺癌骨转移

7. 关键注意事项

样本处理：

血清/血浆：避免溶血，4℃离心后分装

骨组织：充分匀浆后离心取上清

实验优化：

高浓度样本建议1:10-1:100稀释

每板必须包含标准曲线和质控

干扰因素：

避免反复冻融（≤3次）

脂血样本需超速离心

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。