人MIP-3α/CCL20elisa试剂盒 新品

产品介绍：

是一种趋化因子，主要通过与受体 CCR6 结合，招募树突细胞、T细胞（特别是Th17细胞）、B细胞等，参与炎症反应、黏膜免疫、自身免疫病及肿瘤微环境调控。

本试剂盒采用 双抗体夹心ELISA法，可高灵敏度、高特异性地定量检测人血清、血浆、细胞培养上清等样本中的 MIP-3α/CCL20 水平，适用于免疫学、肿瘤学及感染性疾病研究。

1. 试剂盒基本信息

检测目标：人MIP-3α/CCL20蛋白

检测方法：双抗体夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）

检测范围：通常 15.6–1000 pg/mL（不同品牌可能略有差异）

灵敏度：通常 <5 pg/mL（最低检测限）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆、唾液、支气管肺泡灌洗液（BALF）等

检测时间：约 3–4小时（具体取决于操作流程）

2. 试剂盒组成

组分  说明

预包被微孔板  96孔板（抗人CCL20抗体预包被）

标准品（重组人CCL20）  冻干粉或液体，浓度梯度（如0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）

检测抗体（生物素标记）  生物素化抗人CCL20抗体

酶结合物（SA-HRP）  链霉亲和素-辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）

TMB显色液  3,3',5,5'-四甲基联苯胺（HRP底物）

终止液  1M或2M硫酸（H?SO?）

洗涤缓冲液（10×或20×）  PBS-Tween或其他缓冲液

样本稀释液  用于稀释高浓度样本

封板膜  防止蒸发和污染

3. 检测原理

捕获抗体结合：样本中的CCL20与预包被在微孔板上的抗体结合。

检测抗体结合：加入生物素标记的二抗，形成“抗体-CCL20-生物素抗体”复合物。

酶结合物反应：加入链霉亲和素-HRP（SA-HRP），与生物素结合。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显蓝色。

终止反应：加入终止液（H?SO?），颜色由蓝变黄。

检测吸光度：在450 nm（主波长）和570/630 nm（参考波长）下测定OD值。

计算浓度：根据标准曲线计算样本中CCL20浓度。

4. 操作步骤（简要）

标准品和样本准备：复溶标准品，稀释样本（如需要）。

加样：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育1–2小时。

洗涤：洗板3–5次，去除未结合物。

加检测抗体：加入生物素化抗体，37℃孵育1小时。

加酶结合物：加入SA-HRP，37℃孵育30分钟。

显色：加入TMB，避光反应10–30分钟。

终止：加入终止液，立即读数。

5. 应用领域

炎症性疾病：类风湿关节炎（RA）、炎症性肠病（IBD）、银屑病等。

感染免疫：HIV、HPV、COVID-19等病毒感染中CCL20的调控作用。

肿瘤研究：CCL20在结直肠癌、肝癌等肿瘤微环境中招募免疫细胞。

黏膜免疫：呼吸道、肠道黏膜中CCL20参与抗菌防御。

自身免疫病：多发性硬化（MS）、系统性红斑狼疮（SLE）等。

6. 注意事项

样本处理：

血清/血浆：离心去除颗粒物，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片，-80℃长期保存。

标准曲线：每次实验需新鲜配制，确保线性（R2≥0.99）。

干扰因素：高浓度样本需适当稀释，避免溶血或脂血影响。

重复性：建议每样本做复孔，减少误差。

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感