人MCP-1/CCL2elisa试剂盒 新品

人MCP-1/CCL2elisa试剂盒

产品简介:

是一种重要的趋化因子，主要参与单核细胞、T细胞和巨噬细胞的募集，在炎症、自身免疫病、动脉粥样硬化、肿瘤微环境调控等过程中发挥关键作用。

本试剂盒采用 双抗体夹心ELISA法，可定量检测人血清、血浆、细胞培养上清等样本中的 MCP-1/CCL2 水平，适用于科研、临床前研究和部分临床检测。

1. 试剂盒基本信息

检测目标：人MCP-1（CCL2）蛋白

检测方法：双抗体夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）

检测范围：通常 15.6–1000 pg/mL（不同品牌可能略有差异）

灵敏度：通常 <5 pg/mL（最低检测限）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆等

检测时间：约 3–4小时（具体取决于操作流程）

2. 试剂盒组成

组分  说明

预包被微孔板  96孔板（抗人MCP-1抗体预包被）

标准品（重组人MCP-1）  冻干粉或液体，浓度梯度（如0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）

检测抗体（生物素标记）  生物素化抗人MCP-1抗体

酶结合物（SA-HRP）  链霉亲和素-辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）

TMB显色液  3,3',5,5'-四甲基联苯胺（HRP底物）

终止液  1M或2M硫酸（H?SO?）

洗涤缓冲液（10×或20×）  PBS-Tween或其他缓冲液

样本稀释液  用于稀释高浓度样本

封板膜  防止蒸发和污染

3. 检测原理

捕获抗体结合：样本中的MCP-1与预包被在微孔板上的抗体结合。

检测抗体结合：加入生物素标记的二抗，形成“抗体-MCP-1-生物素抗体”复合物。

酶结合物反应：加入链霉亲和素-HRP（SA-HRP），与生物素结合。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显蓝色。

终止反应：加入终止液（H?SO?），颜色由蓝变黄。

检测吸光度：在450 nm（主波长）和570/630 nm（参考波长）下测定OD值。

计算浓度：根据标准曲线计算样本中MCP-1浓度。

4. 操作步骤（简要）

标准品和样本准备：复溶标准品，稀释样本（如需要）。

加样：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育1–2小时。

洗涤：洗板3–5次，去除未结合物。

加检测抗体：加入生物素化抗体，37℃孵育1小时。

加酶结合物：加入SA-HRP，37℃孵育30分钟。

显色：加入TMB，避光反应10–30分钟。

终止：加入终止液，立即读数。

5. 应用领域

炎症性疾病：类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、动脉粥样硬化等。

肿瘤研究：MCP-1在肿瘤微环境中促进巨噬细胞浸润（如乳腺癌、肺癌）。

神经退行性疾病：阿尔茨海默病（AD）、多发性硬化（MS）等。

感染与免疫：HIV、COVID-19等病毒感染中的炎症反应。

药物研发：评估抗炎药物或免疫调节剂对MCP-1表达的影响。

6. 注意事项

样本处理：

血清/血浆：离心去除颗粒物，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片，-80℃长期保存。

标准曲线：每次实验需新鲜配制，确保线性（R2≥0.99）。

干扰因素：溶血、高脂血样本可能影响结果，需适当稀释。

重复性：建议每样本做复孔，减少误差。

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。