人L-Selectin/CD62Lelisa试剂盒

人L-Selectin/CD62Lelisa试剂盒

产品简介:

1. 试剂盒基本信息

检测目标：人L-选择素（L-Selectin/CD62L），一种细胞黏附分子，主要表达于白细胞表面，参与炎症和免疫应答。

检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、白细胞裂解液等。

灵敏度：通常≤0.1 ng/mL（不同品牌有差异）。

检测范围：常见0.156–10 ng/mL（部分试剂盒可达0.312–20 ng/mL）。

特异性：特异性识别人CD62L，不与E-选择素（CD62E）、P-选择素（CD62P）或其他黏附分子交叉反应。

2. 试剂盒组成

典型试剂盒包含以下组分（以96孔板为例）：

预包被微孔板：抗人CD62L单克隆抗体包被的96孔板。

标准品：重组人CD62L蛋白（冻干粉或液体，梯度浓度：0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10 ng/mL）。

检测抗体：生物素标记的抗人CD62L二抗。

酶结合物：HRP标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。

显色底物：TMB（四甲基联苯胺）溶液。

终止液：1M或2M硫酸溶液。

洗涤缓冲液：10–20×浓缩PBS/TBS（含0.05% Tween-20）。

样本稀释液/封闭液：含1% BSA的PBS。

其他：封板膜、说明书、质控样本（高/低浓度）。

3. 检测原理

抗原捕获：样本中的CD62L与预包被抗体结合。

信号放大：生物素化二抗与CD62L结合，再通过HRP-链霉亲和素催化TMB显色。

定量分析：450 nm波长下测OD值，浓度与吸光度呈正相关。

4. 操作步骤（简化版）

标准品与样本准备：标准品复溶并梯度稀释，样本按说明书稀释（如1:5）。

加样孵育：100 μL/孔，37℃孵育1–2小时。

洗涤：用洗涤液洗板3–5次（每次浸泡30秒）。

加检测抗体：100 μL/孔，37℃孵育1小时。

加酶结合物：100 μL/孔，37℃孵育30分钟。

显色与终止：加入TMB避光反应10–15分钟，加终止液后30分钟内检测。

5. 数据分析

使用四参数逻辑（4PL）或对数拟合绘制标准曲线。

样本浓度需乘以稀释倍数，复孔CV值应<10%。

6. 应用领域

炎症研究：CD62L在白细胞迁移和炎症反应中起关键作用。

免疫疾病：自身免疫病（如类风湿关节炎）中CD62L表达异常。

癌症研究：肿瘤微环境中白细胞浸润的调控机制。

药物开发：评估抗炎或免疫调节药物对CD62L的影响。

7. 关键注意事项

样本处理：

血浆需离心去除血小板（避免假性升高）。

避免反复冻融（≤3次），分装保存于-80℃。

实验优化：

高浓度样本需进一步稀释（检测范围外需重测）。

若背景高，可增加封闭时间（如37℃封闭1小时）。

干扰因素：

溶血或脂血样本需预处理（超速离心或过滤）。

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。