兔L-Selectin/CD62Lelisa试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒用于定量检测兔血清、血浆或细胞培养上清液中的L-Selectin(CD62L)含量。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)技术，具有高灵敏度、高特异性和良好的重复性。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。将抗兔L-Selectin抗体预包被在微孔板上，加入标准品或样品后，其中的L-Selectin会与固相抗体结合。洗板后加入生物素标记的抗兔L-Selectin检测抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素，最后加入TMB底物显色。颜色的深浅与样品中L-Selectin的浓度呈正相关。

试剂盒组成

预包被微孔板: 96孔(8孔×12条)，可拆卸

标准品(冻干粉): 2支(1000pg/mL)，使用前用标准品稀释液溶解

标准品稀释液: 1瓶(10mL)

生物素标记抗体(100×): 1支(120μL)

抗体稀释液: 1瓶(12mL)

HRP标记链霉亲和素(100×): 1支(120μL)

链霉亲和素稀释液: 1瓶(12mL)

TMB底物溶液: 1瓶(10mL)

终止液(2M H₂SO₄): 1瓶(10mL)

洗涤液(20×): 1瓶(30mL)

封板膜: 4张

说明书: 1份

样本要求

血清: 室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000rpm离心20分钟取上清

血浆: EDTA或肝素抗凝，2000-3000rpm离心20分钟取上清

细胞培养上清: 2000rpm离心20分钟去除颗粒和聚合物

样本应避免反复冻融，短期保存可置于2-8℃，长期保存应分装后-20℃保存

操作步骤

试剂准备:

将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍

将生物素标记抗体和HRP标记链霉亲和素分别用相应稀释液稀释100倍

标准品稀释:

用标准品稀释液将标准品原液(1000pg/mL)按1:2倍比稀释为500、250、125、62.5、31.25、15.625pg/mL

加样:

分别设空白孔、标准孔和样本孔

空白孔加标准品稀释液100μL

标准孔加不同浓度标准品100μL

样本孔加待测样本100μL

37℃孵育90分钟

洗板:

弃去液体，每孔加洗涤液350μL，静置30秒后弃去，重复5次

加检测抗体:

每孔加生物素标记抗体100μL

37℃孵育60分钟

洗板5次

加酶结合物:

每孔加HRP标记链霉亲和素100μL

37℃孵育30分钟

洗板5次

显色:

每孔加TMB底物90μL

37℃避光显色15-30分钟

终止反应:

每孔加终止液50μL

测定:

450nm波长读取OD值(建议630nm作为参考波长)

性能参数

检测范围: 15.625-1000pg/mL

灵敏度: <5pg/mL

批内变异系数: <10%

批间变异系数: <15%

回收率: 85-115%

特异性: 不与兔其他细胞因子发生交叉反应

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