人Free Soluble RANKLelisa试剂盒

人Free Soluble RANKLelisa试剂盒

实验原理:

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预先包被抗人RANKL捕获抗体的微孔板中，依次加入标准品、质控品和样本，温育后洗涤。再加入HRP标记的检测抗体，形成抗体-RANKL-酶标抗体复合物。加入底物TMB显色，颜色深浅与RANKL浓度正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中RANKL的浓度。

检测性能

灵敏度：最低检测限为0.2 pg/mL（0.01 pmol/L）。

检测范围：0–40 pg/mL（0–2 pmol/L）。

特异性：仅检测游离可溶性RANKL，与骨保护素（OPG）等无交叉反应。

精密度：板内变异系数≤5%，板间变异系数≤3%。

稳定性：样本在-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

适用样本及处理

样本类型：血清、血浆（EDTA或肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆等。

处理要求：

血清/血浆：室温放置或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清。

细胞培养上清：1000×g离心20分钟，取上清。

组织匀浆：用预冷PBS冲洗组织，剪碎后匀浆，5000×g离心5-10分钟，取上清。

试剂盒组成

预包被酶标板：96孔或48孔，包被抗人RANKL捕获抗体。

标准品：不同浓度的RANKL标准品，用于绘制标准曲线。

检测抗体：HRP标记的抗人RANKL检测抗体。

洗涤液：用于洗涤未结合的物质。

底物液：TMB显色液。

终止液：酸性溶液，终止显色反应。

其他：封板膜、说明书等。

操作步骤

准备：平衡试剂盒至室温，稀释洗涤液。

加样：加入标准品和样本，37℃温育。

洗板：洗涤液洗涤，去除未结合物质。

加检测抗体：加入HRP标记的检测抗体，温育。

洗板：再次洗涤，去除未结合的检测抗体。

显色：加入TMB底物液，避光孵育。

终止反应：加入终止液终止显色。

测定：酶标仪在450nm波长下测定OD值。

注意事项

样本处理：避免溶血样本，正确离心和保存样本。

操作规范：严格按说明书操作，避免交叉污染。

质量控制：每次实验做标准曲线，确保结果准确。

应用领域

科研研究：用于研究RANKL在骨代谢、免疫调节等生理和病理过程中的作用。

疾病诊断：辅助诊断与RANKL异常相关的疾病，如骨质疏松症、类风湿性关节炎等14

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。