大鼠IGFBP-2elisa试剂盒

大鼠IGFBP-2elisa试剂盒

产品简介:

1. 基本原理

双抗体夹心ELISA法：试剂盒采用特异性抗大鼠IGFBP-2抗体包被微孔板，样本中的IGFBP-2与抗体结合后，再加入酶标记的二抗，形成“抗体-抗原-酶标二抗”复合物。通过底物显色，颜色深浅与IGFBP-2浓度成正比。

2. 主要组分

预包被微孔板：抗大鼠IGFBP-2单克隆抗体固定于96孔板。

标准品：重组大鼠IGFBP-2（浓度梯度已知，用于绘制标准曲线）。

检测抗体：生物素或HRP标记的二抗。

显色底物：TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）或其他显色剂。

终止液（通常为硫酸溶液）。

洗涤缓冲液（如PBS-Tween）。

样本稀释液。

3. 检测步骤

加样：标准品和待测样本加入微孔板。

孵育：37℃孵育使IGFBP-2与抗体结合。

洗涤：去除未结合物质。

加酶标二抗：形成复合物。

显色：加入底物后避光反应。

终止：加入终止液，颜色由蓝变黄。

检测：450 nm波长测OD值，计算浓度。

4. 技术参数

检测范围：通常为15.6–1000 pg/mL（不同品牌可能有差异）。

灵敏度：最低检测限可达<10 pg/mL。

特异性：仅识别大鼠IGFBP-2，不与其他IGFBP家族交叉反应。

重复性：板内、板间变异系数（CV）<10%。

5. 样本要求

类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞上清。

处理：避免反复冻融，4℃短期保存，-20℃/-80℃长期保存。

稀释：高浓度样本需用稀释液调整至线性范围内。

6. 应用领域

代谢研究：IGFBP-2与肥胖、糖尿病相关。

生长发育：调控IGF-1的生物利用度。

肿瘤研究：某些癌症中IGFBP-2表达异常。

药物开发：评估药物对IGF系统的影响。

7. 注意事项

标准化操作：严格按说明书步骤进行，避免孔间污染。

质量控制：建议每板设置复孔和空白对照。

数据拟合：使用四参数逻辑（4-PL）曲线拟合标准品浓度。

应用与服务

该试剂盒广泛应用于生物医学研究领域，如机制研究、疾病标志物检测等。部分厂家提供免费代测服务和专业技术支持，方便用户获得准确可靠的实验结果。

操作要点：

需严格遵守试剂盒说明书操作，建议做复孔及标准曲线。

洗涤过程至关重要，洗涤不充分会影响结果准确性。

所有试剂使用前需恢复至室温，避免批号混用。

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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

注意事项

试剂盒组分应按说明储存，使用前平衡至室温。

实验中需避免交叉污染，建议使用一次性吸头。

充分混匀对实验结果至关重要。

试剂盒仅供研究使用，不可用于临床诊断。

显色液需避光保存，终止液为2M硫酸，操作时需安全防护。