虾肝肠胞虫（EHP）/急性肝胰腺坏死病（AHPND/EMS）双重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于对虾养殖业的疾病快速诊断，能够在一个反应体系中同时检测两种严重影响对虾养殖效益的病原体。

虾肝肠胞虫 (EHP)：一种微孢子虫，主要寄生于对虾肝胰腺，导致对虾生长缓慢、个体大小不一，饲料转化率低。

 急性肝胰腺坏死病 (AHPND/EMS)：由特定毒力菌株的副溶血性弧菌等引起，导致对虾肝胰腺坏死，出现“偷死”现象，死亡率极高。

该试剂盒基于双重实时荧光定量PCR（Duplex qPCR）技术，通过检测病原体的特异性基因序列，实现快速、精准的鉴别诊断。

�� 产品核心信息

检测对象：

虾肝肠胞虫 (EHP) DNA。

致急性肝胰腺坏死病副溶血性弧菌 (VpAHPND) 特异性毒力基因（如*pirvp*基因）。

检测原理：双重TaqMan荧光探针法。在同一个PCR反应体系中，针对EHP和VpAHPND的保守基因序列设计两对特异性引物和两种不同荧光标记（如FAM和VIC）的探针，实现同步扩增和检测。

荧光通道：

FAM通道：检测虾肝肠胞虫（EHP）。

VIC/HEX通道：检测急性肝胰腺坏死病病原（VpAHPND）。

（部分试剂盒可能包含内参基因通道，用于监控样本质量）。

适用仪器：ABI 7500、LightCycler 480、CFX96、罗氏480等具备双通道或多通道检测功能的实时荧光定量PCR仪。

检测样本：对虾肝胰腺、鳃组织、虾苗、粪便或养殖水体样本。

�� 试剂盒组成（以48T为例）

组分名称  规格  作用说明

2×Dual qPCR Mix  500 μL x 1管  预混液，含dNTPs、热启动Taq酶、Mg²⁺、缓冲液

EHP Primer/Probe Mix  100 μL x 1管  含EHP特异性引物和FAM标记的探针

AHPND Primer/Probe Mix  100 μL x 1管  含VpAHPND特异性引物和VIC/HEX标记的探针

阳性对照 (PC)  50 μL x 1管  含EHP和VpAHPND目标基因片段的混合质粒DNA

阴性对照 (NC)  250 μL x 1管  无DNA酶水（ddH₂O）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与DNA提取

组织样本：取对虾肝胰腺或鳃组织约20 mg，加入180 μL缓冲液GA，匀浆。

DNA提取：

取200 μL匀浆液，使用细菌/基因组DNA提取试剂盒（离心柱法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱DNA。

关键点：提取的DNA建议立即使用，或置于-20℃保存（避免反复冻融）。

注意事项

防污染：必须严格实行分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。阳性对照应单独存放和使用。

探针保护：荧光探针对光敏感，使用和保存过程中应避光。

临床意义：检测结果需结合对虾的临床症状进行综合判断。

EHP感染：通常表现为生长缓慢、个体差异大、肝胰腺颜色变浅。

AHPND感染：通常表现为肝胰腺萎缩、坏死、空肠空胃、大量死亡。

生物安全：阳性对照含有病原基因片段，操作时应视为具有潜在生物危害性，废弃物需高压灭菌处理。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。