病毒性神经坏死病毒（VNNV）RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于水产养殖领域，针对鱼类病毒性神经坏死病（也称病毒性脑病和视网膜病，VERD）进行高灵敏度、高特异性的检测。

该病主要危害海水鱼苗，致死率极高，检测对象通常为海水鱼类（如石斑鱼、鲈鱼、鲷科鱼类等）的脑组织、眼组织或全身匀浆。

 �� 产品核心信息

检测对象：病毒性神经坏死病毒（Viral Nervous Necrosis Virus, VNNV）RNA。

检测原理：一步法RT-qPCR（TaqMan荧光探针法）。针对VNNV的衣壳蛋白（CP）基因或RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）基因的保守区域设计特异性引物和探针。

荧光通道：FAM（检测VNNV），部分试剂盒可能包含VIC/HEX通道（用于内参基因，如鱼的β-actin）。

适用仪器：ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96、Roche 480等实时荧光定量PCR仪。

检测样本：鱼的脑组织、视网膜组织、脾脏、肾脏或全鱼匀浆液。

�� 试剂盒组成（以48T/48T为例）

组分名称  规格  作用说明

2×One Step RT-PCR Buffer  500 μL x 1管  含dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液

Enzyme Mix  50 μL x 1管  含逆转录酶（RTase）和热启动Taq酶

VNNV Primers & Probe  100 μL x 1管  含VNNV特异性引物和FAM标记的探针

阳性对照 (PC)  50 μL x 1管  含VNNV目标基因片段的质粒或体外转录RNA（已知浓度，如1×10⁸ copies/μL）

阴性对照 (NC)  250 μL x 1管  无RNA酶水（RNase-free Water）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与RNA提取

组织样本：取鱼的脑组织或眼组织约20 mg，加入500 μL生理盐水或裂解液，使用组织研磨器制备匀浆。

RNA提取：

取200 μL匀浆液，使用病毒RNA提取试剂盒（如柱式法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱RNA。

关键点：操作全程需在冰上或4℃环境下进行，防止RNA降解。使用无RNA酶的耗材。

2. 反应体系配制（冰上操作）

总体系：20 μL。

配制表：

试剂  体积

2×One Step RT-PCR Buffer  10 μL

Enzyme Mix  1 μL

VNNV Primers & Probe  1 μL

模板RNA  2-5 μL

RNase-free Water  补足至20 μL

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：FAM通道无扩增曲线（Ct值未定义或≥40）。

阳性对照 (PC)：FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线，且Ct值 ≤ 30。

2. 样本判定

阳性 (+)：FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有VNNV病毒。

可疑 (±)：Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检，若复测Ct值 < 35则判为阳性。

阴性 (-)：FAM通道无扩增曲线，或Ct值 ≥ 40。

⚠️ 注意事项

防污染：必须严格实行分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。阳性对照应单独存放和使用。

RNA酶防护：VNNV是RNA病毒，极易降解。操作时必须佩戴口罩、手套，使用带滤芯的枪头。

生物安全：阳性对照含有病毒基因片段，操作时应视为具有潜在生物危害性，废弃物需高压灭菌处理。

临床意义：检测结果需结合鱼的临床症状（如鱼体发黑、乱窜、旋转游动、腹部朝上等）及病理变化（神经系统空泡化）进行综合判断。

公司正在出售的产品：

PCR试剂盒的核心类型

1. 常规PCR试剂盒

原理：通过引物扩增目标DNA片段，产物经琼脂糖电泳检测。

特点：操作简单、成本低，适用于定性检测（如牛疱疹病毒1型PCR试剂盒）。

典型应用：动物病原体筛查。

2. 荧光定量PCR（qPCR）试剂盒

探针法（TaqMan）：

利用特异性探针结合目标序列，荧光信号实时监测扩增过程。

优势：高特异性（如牛白血病病毒试剂盒）、宽线性范围（10²–10⁷拷贝/μL）。

染料法（SYBR Green）：

染料嵌入双链DNA发光，成本较低，但需优化引物特异性。

3. 恒温扩增试剂盒

技术：LAMP、RPA等，无需热循环仪，适合现场检测。