草鱼出血病II型病毒（GCRV II）RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于水产养殖领域，针对草鱼出血病II型病毒（也称为草鱼呼肠孤病毒II型）进行高灵敏度、高特异性的检测，帮助养殖户和检测机构快速诊断“草鱼出血病”。

该试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术（qRT-PCR），能够实现病毒的早期诊断、定量分析及流行病学调查。

�� 产品核心信息

检测对象：草鱼出血病II型病毒（Grass Carp Reovirus II, GCRV II）RNA。

检测原理：一步法RT-qPCR（TaqMan荧光探针法）。针对GCRV II基因组的保守区域（如S10或M9片段）设计特异性引物和探针。

 荧光通道：

FAM通道：检测GCRV II靶基因。

HEX/VIC通道（内参）：部分试剂盒包含草鱼β-actin或18S rRNA内参基因检测，用于监控样本质量及排除PCR抑制物干扰。

适用仪器：ABI 7500、LightCycler 480、CFX96、杭州博日系列等实时荧光定量PCR仪。

检测样本：草鱼的肾脏、脾脏、脑组织、鳃或体液匀浆液。

�� 试剂盒组成（以50T为例）

组分名称  规格  作用说明

2×qRT-PCR Buffer  500 μL x 1管  含dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液

Enzyme Mix  50 μL x 1管  含逆转录酶（RTase）和热启动Taq酶

Primers & Probe Mix  100 μL x 1管  含GCRV II特异性引物和FAM标记的探针

阳性对照 (PC)  50 μL x 1管  含GCRV II目标基因片段的质粒或体外转录RNA

阴性对照 (NC)  250 μL x 1管  无RNA酶水（RNase-free Water）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与RNA提取

组织样本：取草鱼肾脏、脾脏或脑组织约20-50 mg，加入500 μL生理盐水或TRIzol，使用组织研磨器制备匀浆。

RNA提取：

取200 μL匀浆液，使用磁珠法或离心柱法病毒RNA提取试剂盒进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液（Elution Buffer）洗脱RNA。

关键点：操作过程中必须佩戴手套，使用无RNA酶的耗材，避免RNA降解。

2. 反应体系配制（冰上操作）

总体系：20 μL。

配制表：

试剂  体积

2×qRT-PCR Buffer  10 μL

Enzyme Mix  1 μL

Primers & Probe Mix  1 μL

模板RNA  2-5 μL

RNase-free Water  补足至20 μL

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：FAM通道无扩增曲线（Ct值未定义或≥40）。

阳性对照 (PC)：FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线，且Ct值 ≤ 30。

2. 样本判定

阳性 (+)：FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有GCRV II病毒。

可疑 (±)：Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检，若复测Ct值 < 35则判为阳性。

阴性 (-)：FAM通道无扩增曲线，或Ct值 ≥ 40。

⚠️ 注意事项

防污染：必须严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区）。阳性对照应单独存放，避免气溶胶污染导致假阳性。

RNA酶防护：GCRV II是RNA病毒，极易降解。提取RNA时必须使用无RNA酶的枪头和离心管，并佩戴口罩和手套。

生物安全：阳性对照含有病毒基因片段，操作时应视为具有潜在传染性，需在生物安全柜内操作。

临床意义：检测结果需结合草鱼的临床症状（如口腔出血、肌肉出血点、肠道充血等）进行综合判断。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。