锦鲤疱疹病毒（KHV）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于检测锦鲤及普通鲤鱼是否感染了锦鲤疱疹病毒（Koi Herpesvirus, KHV），也称为鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3）。

由于该病是世界动物卫生组织（OIE）法定报告的疫病，且中国将其列为二类疫病，因此该试剂盒在水产养殖疫病防控、进出口检疫及无规定疫病场建设中具有重要作用。

�� 产品核心信息

检测对象：锦鲤疱疹病毒（KHV/CyHV-3）。

检测原理：实时荧光定量PCR（qPCR），采用TaqMan荧光探针技术。试剂盒通常针对KHV的保守基因序列（如胸苷激酶基因TK或衣壳蛋白基因sph）设计特异性引物和探针。

 灵敏度与特异性：

高灵敏度：最低检测限通常可达 10³ copies/mL（部分产品可达几百拷贝），能够检测出极低浓度的病毒。

高特异性：特异性高达95%-99%，不会与鲤疱疹病毒1型（CyHV-1）、鲤疱疹病毒2型（CyHV-2）或其他细菌发生交叉反应。

适用样本：锦鲤/鲤鱼的鳃、肾、脾组织，以及水体、鱼卵等。

适用仪器：适用于主流的荧光定量PCR仪（如ABI 7500、LightCycler等）。

�� 产品组成与规格

组分名称  规格示例  说明

qPCR反应液 (2×Premix)  800 μL (管)  预混了dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等核心成分。

酶混合物 (Enzyme Mix)  100 μL (管)  含热启动Taq DNA聚合酶，需-20℃保存。

KHV引物/探针混合液  100 μL (管)  针对KHV保守序列设计，探针通常标记FAM荧光基团。

阳性对照 (Positive Control)  50 μL  含KHV目标基因片段的质粒DNA（如1×10⁸ copies/μL），用于验证试剂有效性。

阴性对照 (Negative Control)  1 mL  无菌双蒸水或缓冲液，用于监控实验过程是否被污染。

核酸释放剂/提取液  部分赠送  用于快速裂解组织释放DNA（部分产品包含）。

�� 操作流程简述

样本采集与处理：

组织样本：取病鱼的鳃、肾或脾组织（病毒载量最高），加入PBS缓冲液进行研磨制成匀浆，离心取上清。

水体样本：需先通过滤膜富集水中的病毒颗粒，再进行DNA提取。

DNA提取：

使用商用基因组DNA提取试剂盒（柱式法或磁珠法）提取样本中的总DNA。

关键点：操作过程要防止DNA降解和交叉污染。

试剂准备与加样：

将反应液、酶液、引物探针在冰上解冻并充分混匀，离心30秒。

按说明书比例配制反应体系（通常为20-25 μL），向反应管中加入提取的DNA模板（通常5-10 μL）。

必须设置：阴性对照（无菌水）和阳性对照（试剂盒提供）。

上机扩增：

将反应管放入荧光定量PCR仪。

推荐程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环反应：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（在此步收集荧光），进行40-45个循环。

结果判读：

阳性（+）：Ct值 < 35-40（具体阈值参见说明书），且扩增曲线呈现明显的指数增长期。

阴性（-）：无Ct值或Ct值 ≥ 40，且无扩增曲线。

无效：阳性对照未检出或阴性对照检出，需排查污染或试剂失效原因并重做。

⚠️ 注意事项与安全提示

严格分区操作：为防止气溶胶污染导致假阳性，实验必须严格分区（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），且各区物品专用。

试剂保存：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存。酶混合物对温度敏感，应避免反复冻融。

样本采集时机：KHV的发病水温通常在 23-28℃，低于18℃或高于30℃时病毒可能潜伏，此时采样检测易出现假阴性。

废弃物处理：反应结束后，严禁开盖，以免扩增产物（含荧光染料和DNA）污染环境。应将反应管密封后作为生物废弃物处理。

临床意义：KHV致死率极高（可达80%-100%），且目前尚无确切有效的治疗方法。早期检测有助于及时隔离病鱼、消毒水体，防止疫情扩散。

公司正在出售的产品：

注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。