赤点石斑鱼神经坏死病毒（RGNNV）RNA核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

产品介绍：

赤点石斑鱼神经坏死病毒（RGNNV）RNA核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 是一种专门用于快速、高灵敏度检测石斑鱼等海水鱼类中神经坏死病毒（Red-spotted Grouper Nervous Necrosis Virus, RGNNV）的分子诊断工具。该试剂盒基于逆转录-环介导恒温扩增（RT-LAMP）技术，能够对病毒的RNA进行特异性扩增和检测，适用于养殖场、检疫机构及科研单位的快速筛查。

 以下是该试剂盒的详细解读：

�� 检测原理与核心背景

检测原理：基于RT-LAMP（逆转录-环介导恒温扩增）技术。该技术通过设计针对RGNNV病毒基因组保守区（通常为RNA依赖的RNA聚合酶基因（RdRp）或衣壳蛋白基因）的多组特异性引物，在恒定温度下（通常为63-65℃）对病毒RNA进行反转录和指数级扩增。

在扩增过程中，随着DNA的合成，反应体系中的荧光染料（如SYTO-9或钙黄绿素）会嵌入双链DNA并释放荧光信号。

仪器实时监测荧光信号的变化，根据Tt值（指数扩增时间）或终点荧光强度进行判定。

核心背景：神经坏死病毒（NNV）是导致海水鱼类，特别是石斑鱼苗种大量死亡的“隐形杀手”，具有传播快、致死率高（可达90%以上）的特点。

�� 产品核心参数与组成

项目  详细信息

检测方法  RT-LAMP (逆转录-环介导恒温扩增)

检测靶标  RGNNV RNA (如 RdRp 基因)

产品规格  48T / 50T (即 48/50 次测试)

检测限  最低检测限可达 10³ copies/mL

主要组分  RT-LAMP反应液 (含引物、dNTPs等)、酶混合液 (含Bst酶、逆转录酶)、阳性对照 (RGNNV RNA片段)、阴性对照 (无菌水)

��️ 操作流程

样本处理：提取待测样本（如鱼脑、眼组织、鱼苗匀浆液）的总RNA。

试剂准备：在冰上将RT-LAMP反应液和酶混合液按说明书比例混合，配制成预混液。

加样：将配制好的预混液分装到PCR管中，然后加入RNA模板，同时设置阳性和阴性对照。

恒温扩增：将反应体系放入恒温荧光检测仪（如 Genie II, ESE Tube Scanner 等）中，设置反应温度为 63℃，反应时间通常为 45-60分钟。

结果分析：仪器实时监测荧光信号变化，自动生成扩增曲线并判读结果。

�� 结果判读标准

结果类型  判读标准 (仪器法)  判读标准 (肉眼/目视法)  解释

阳性 (+)  荧光曲线呈典型指数增长，且 Tt 值 < 阈值 (如 30-40分钟)。  反应液发出绿色荧光 (或特定颜色)。  样品中检测到赤点石斑鱼神经坏死病毒（RGNNV），判定为阳性。

阴性 (-)  荧光曲线为直线，无指数增长期。  反应液为橙色 (或原始颜色)。  样品中未检测到赤点石斑鱼神经坏死病毒（RGNNV），判定为阴性。

无效  阳性对照未扩增，或阴性对照出现扩增。  阳性对照无颜色变化，或阴性对照变色。  实验失败（可能存在试剂失效或污染），结果无效，需重做。

�� 产品特点

快速便捷：无需复杂的热循环，全程检测时间通常在1-2小时内完成（含核酸提取），非常适合现场快速检测和基层疫病防控。

高灵敏度：最低检出限可达1000拷贝/毫升，能够检测到极低含量的病毒。

高特异性：针对病毒保守基因设计引物，与其他鱼类病原（如虹彩病毒、弹状病毒）无交叉反应。

⚠️ 注意事项

防止污染：恒温扩增技术灵敏度极高，极易受气溶胶污染影响。建议严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、检测区），并使用带滤芯的枪头。

避光保存：反应液中的荧光染料对光敏感，试剂应 -20℃ 避光 保存，使用前避免长时间暴露在强光下。

适用范围：主要用于水产养殖病害监测、进出口检验检疫和科研实验。部分产品已获批兽药注册，可用于临床诊断。

公司正在出售的产品：

高特异性

引物设计基于目标基因保守区域，可区分高度同源序列（如病毒变异株）。

高灵敏度

检测限低至10拷贝/反应，适用于微量样本。

高效扩增

热启动酶（如HotStarTaq）减少非特异性扩增，30分钟内完成40个循环。

防污染设计

UNG酶系统降解残留产物，避免交叉污染。

稳定性提升

冻干预混技术实现常温运输，操作便捷。