小鼠气管平滑肌细胞
产品信息：
产品名称 小鼠气管平滑肌细胞
组织来源 气管
种属 小鼠
产品规格 5×10^5Cells/T25
英文名称 | Mouse Tracheal Smooth Muscle Cells | 规格 | 5×105 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 | 货号 | P-X1766 |
培养信息：
方法简介：实验室分离的小鼠气管平滑肌细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶联合消化法结合组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：实验室分离的小鼠气管平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称：小鼠气管平滑肌细胞
英文简称：TSMCs
组织来源：气管
产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶
培养信息：包被条件
培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠气管平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介 ：
小鼠气管平滑肌细胞分离自气管组织；气管(Trachea)，呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体(相当胸骨角平面)交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成，有弹性，软骨为“C”字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。气管平滑肌是气管的重要结构组成之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用；能够保持气道张力，维持气道管状形态，从而有利于气体流通，保持肺部通气。气管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态：大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。气管平滑肌细胞的异常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是气道重塑的关键。
原代细胞分离：
组织取材
无菌操作是底线：取材前对动物/组织进行严格消毒，全程在超净台内操作，所有工具提前灭菌
新鲜度决定活性：取材后立即放入预冷的含双抗的PBS中，30分钟内完成分离，若无法即时处理，可暂存于4℃冰箱（不超过24小时）
精准取材：避开血管、脂肪、结缔组织等非目标组织，比如分离肝细胞时要剔除胆囊，分离神经细胞时要去除脑膜
组织处理
机械法：通过剪碎、研磨、过滤等方式分散组织，适用于结缔组织较少的组织（如肝脏、肾脏），注意力度适中，避免过度研磨损伤细胞
酶解法：根据组织类型选择合适的酶：
胰蛋白酶：适用于消化上皮组织、肝、肾等，浓度0.25%-0.5%，消化时间15-30分钟，37℃
胶原酶：适用于消化结缔组织、脂肪组织、肌肉组织等，浓度0.1%-0.3%，消化时间1-4小时，37℃，可加入EDTA增强效果
透明质酸酶：常与胶原酶联用，消化软骨、滑膜等富含透明质酸的组织
联合法：机械剪碎后再进行酶解，兼顾效率与细胞活性
细胞筛选与纯化
过滤：使用200-400目细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织块
离心：800-1200RPM离心5-8分钟，弃上清后用PBS重洗2-3次，去除细胞碎片和酶液
特异性纯化：使用差速贴壁法（利用不同细胞贴壁速度差异）、密度梯度离心法（如Percoll、Ficoll）、免疫磁珠分选或流式细胞术，获得高纯度目标细胞
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原代细胞实验注意事项：
取材要快、要新鲜、全程无菌
组织离体时间越短越好，冰上操作，减少缺血损伤。
严格控制细胞代数
原代细胞只建议用 P0～P3，代数越高越容易分化、结果越不可靠。
接种密度宁高不低
原代细胞普遍怕稀，太稀不贴壁、不生长、容易凋亡。
消化是关键，宁轻勿重
胰酶 / 胶原酶只消化到细胞变圆就终止，过度消化必死一批。
吹打轻柔，避免机械损伤。
培养基和血清不要随便换批次
血清、基础培养基、添加因子固定厂家固定批次，换批次必须先预实验。
避免频繁折腾细胞
少开培养箱门，不反复观察、不反复拿进拿出，温度、pH 波动对原代杀伤极大。
