兔骨骼肌微血管内皮细胞 新品

细胞简介：

兔骨骼肌微血管内皮细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。微血管又称毛细血管。分布于各种组织和细胞间的最微细的血管。介于微动脉和微静脉之间。平均直径7-9微米，数量极多，成网状分布。管壁由一层内皮细胞及一薄层基膜组成，厚约0.5微米。基膜外面有薄层结缔组织，其中有纤维细胞、巨噬细胞和周细胞等。最细的微血管由一个内皮细胞围成管腔，较粗的微血管由2-3个内皮细胞围成。分布于肌肉组织、神经组织和结缔组织中的微血管，内皮细胞间为缝隙连接（缝隙宽150埃），称连续微血管。血管内皮细胞在器官和组织的结构和功能上起着非常重要的作用。并与多种疾病的发生与发展有关。近年来血管内皮细胞在炎症、休克等一系列病理生理改变中的重要性愈来愈受到人们的重视。研究发现，不同来源的内皮细胞在生物学特征、结构和功能等方面均存在一定差别，而同是微血管内皮细胞，它们又存在器官和组织的特异性。骨骼肌组织是动物体内含量最多的组织，肌肉组织供血丰富，是研究内皮细胞功能和血管生成的理想靶组织。

产品信息：

方法简介：实验室分离的兔骨骼肌微血管内皮细胞采用胶原酶消化结合差速贴壁法、专用培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的兔骨骼肌微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品名称：兔骨骼肌微血管内皮细胞

组织来源：骨骼肌组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养信息：包被条件PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%胰蛋白酶兔骨骼肌微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
原代细胞纯化与鉴定：

纯化方法：

差速贴壁法：利用不同细胞贴壁速度差异，如成纤维细胞贴壁快，上皮细胞贴壁慢，在接种后1-2小时移除未贴壁细胞，可初步分离不同细胞类型。

免疫磁珠分选法/流式细胞术：针对特定细胞表面标志物，利用特异性抗体标记细胞，通过磁珠或流式分选仪分离目标细胞，纯度可达90%以上。

鉴定手段：通过形态学观察（原代细胞形态多样，与传代细胞有差异）、免疫细胞化学染色、RT-PCR检测特异性基因表达等方法，确认目标细胞的纯度和身份。

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