鲍疱疹样病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

预期用途

用于科研领域鲍疱疹样病毒（AbHV）DNA的定性及定量检测，不适用于临床诊断。

技术原理与特点

检测原理
基于荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增AbHV保守基因序列（如DNA聚合酶基因），结合荧光染料（如SYBR Green I）实时监测扩增产物，实现病毒DNA的定量分析。

核心优势

高灵敏度：检测下限可达100拷贝/μL。

高特异性：引物针对AbHV保守区设计，避免与其他疱疹病毒交叉反应。

操作便捷：预混反应液含Taq酶、dNTPs及缓冲体系，用户仅需提供DNA模板。

质控完善：提供阳性对照（非活体DNA片段）和阴性对照，确保实验可靠性。

试剂盒组成

主要组分：

荧光PCR预混液（含染料）

AbHV特异性引物混合液

阳性对照（1×10⁸拷贝/μL DNA片段）

阴性对照（无菌水）

荧光PCR专用模板稀释液

10×ROX校正染料（适配部分机型）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；运输需低温（冰袋或干冰）。

操作步骤

1. 样本准备

样本类型：鲍组织匀浆液、海水或饵料样本。

DNA提取：推荐使用商品化病毒DNA提取试剂盒（如柱式法），或按说明书裂解处理。

2. 阳性对照稀释（示例）

标记6管，分别加入45μL稀释液。

取5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）加入第1管，震荡混匀，得到1×10⁷拷贝/μL梯度，依次稀释至1×10²拷贝/μL。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 |

| 2×荧光PCR预混液 | 10 μL |

| 引物混合液 | 1 μL |

| DNA模板/对照 | 8 μL |

| ROX（按机型需求） | 1 μL |

4. 扩增程序（以ABI 7500为例）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min | |

| 荧光采集 | 60℃ | 10 sec | |

结果判读

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

可疑：35<Ct<40，建议重复检测。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需严格分区，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

安全提示：阳性对照为DNA片段，无传染性，但仍需按生物安全规范操作。

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