大鼠巨噬细胞炎性蛋白2α(MIP-2α)elisa试剂盒 新品

产品介绍：

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠MIP-2α（8kDa）的保守ELR基序（谷氨酸-亮氨酸-精氨酸）。预包被抗大鼠CXCL2单抗（克隆号：MAB452）捕获样本中的MIP-2α，生物素标记的二抗通过链霉亲和素-HRP系统催化超敏TMB显色，450nm吸光度值与MIP-2α浓度呈正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  抗N端表位单抗

重组标准品  0-2000pg/mL  -80℃  活性二聚体（比活性≥1×10 U/mg）

炎症诱导剂  1mL  -20℃  LPS（1mg/mL）+TNF-α（10μg/mL）

血浆稳定液  10mL  4℃  含EDTA/肝素双抗凝

组织保护液  15mL  -20℃  含RNase抑制剂

3. 性能参数

检测范围：31.2-2000pg/mL（可扩展至8000pg/mL）

灵敏度：9.3pg/mL（基于2.5SD空白值）

样本兼容性：

最佳：急性肺炎症肺泡灌洗液

适用：血浆（肝素抗凝）、肝脏匀浆

交叉反应：

大鼠MIP-2α：100%

MIP-1α/1β：<0.1%

人CXCL1/CXCL8：<0.01%

精密度：

批内CV：5.8-7.4%

批间CV：8.6-10.2%

4. 样本处理规范

4.1 肺泡灌洗液采集

气管插管注入3mL冷PBS

轻柔抽吸3次，回收率≥80%

4℃ 500×g离心10分钟去除细胞

4.2 肝组织处理

取左叶50mg

加入450μL含保护液的PBS

珠磨仪匀浆（4℃，30Hz，30秒）

12000×g离心20分钟（4℃）

4.3 特殊处理

血浆：采集后立即加入稳定剂（1:9）

细胞培养：无血清刺激6-24小时

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、31.2、62.5、125、250、500、1000、2000pg/mL

复溶液：含0.1% HSA的PBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（200rpm）

洗板液：含0.01% Proclin 300的TBS

显色时间：精确控制10±0.5分钟

质控标准

空白OD值：≤0.08

最低检测限：≥25pg/mL

LPS刺激阳性对照：≥800pg/mL

6. 主要应用方向

急性肺损伤：中性粒细胞浸润评估

肝纤维化：Kupffer细胞活化监测

脓毒症模型：细胞因子风暴分析

创伤修复：炎症-再生转化研究

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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ELISA之所以被广泛应用，主要归功于以下几个核心优势：

灵敏度高（抓得准）：

它利用酶的催化放大作用，能将微弱的信号放大，因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质（甚至达到皮克级 pg/mL）。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质，它也能“捕捉”到。

特异性强（瞄得准）：

基于抗原-抗体的特异性结合原理，试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应，很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率，结果准确可靠。

操作简便且快速：

相比于一些复杂的仪器分析方法，ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件，按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。

高通量与适用性广：

它通常采用96孔板或48孔板，一次实验可以同时处理几十个样本，非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外，它不仅能测蛋白，还能测抗体、激素、药物残留甚至农药，应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。

安全稳定：

不像放射免疫法那样使用放射性同位素，ELISA使用的是酶标记，对人体和环境无辐射危害，且试剂保存时间较长。