大鼠核因子κB受体激活因子(RANk)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

大鼠核因子κB受体激活因子(RANK) ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其他生物体液中RANK蛋白浓度的科研工具，其检测原理基于双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法：预先将抗大鼠RANK抗体包被在微孔板上，形成固相抗体。加入样本或标准品后，再加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。经过洗涤去除未结合物质后，加入TMB显色底物，在HRP催化下生成蓝色产物，并在酸性条件下变为黄色。颜色深浅与样本中RANK浓度呈正相关，通过酶标仪在450 nm波长处测定吸光度（OD值），并根据标准曲线计算浓度。

检测范围与灵敏度

检测范围：不同品牌略有差异，常见为62.5 pg/mL ～ 4000 pg/mL 或 0.156–10 ng/mL。

灵敏度：最低可检测浓度可达1.0 μg/mL以下或更低，部分试剂盒可达2 pg/mL。

特异性：试剂盒对RANK具有高特异性，与其他细胞因子或结构类似物无明显交叉反应。

样本处理建议

样本类型  处理方式

血清  室温凝固2小时或4℃过夜，1000×g离心10–20分钟，取上清检测或–20℃保存

血浆  使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，采集后30分钟内离心，处理方式同上

细胞上清  1000×g离心20分钟，去除沉淀，立即分析或分装后–20℃保存

组织匀浆  用PBS冲洗组织，剪碎后研磨，可辅以超声或冻融裂解，5000×g离心取上清

注意事项：

避免溶血、高血脂样本，以防干扰结果；

样本应避免反复冻融，保存时间不宜过长（–20℃不超过1个月）。

试剂盒组成（典型）

预包被抗体的96孔板（8×12条）

RANK标准品（冻干粉，需复溶）

生物素标记检测抗体

HRP-亲和素复合物（ABC）

样品稀释液、抗体稀释液、洗涤液（20×或25×浓缩液）

TMB显色液A/B、终止液

封板膜、说明书

操作步骤概要

从2–8℃取出试剂盒，平衡至室温（≥30分钟）；

配制标准品：按说明书进行倍比稀释（如1:2、1:10、1:100），现用现配；

加样：每孔加入100 μL标准品或待测样本，37℃孵育30–90分钟；

洗板：使用自动洗板机或手工洗涤，严格清洗4–6次；

加生物素化抗体，37℃孵育30–60分钟；

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：

ELISA之所以被广泛应用，主要归功于以下几个核心优势：

灵敏度高（抓得准）：

它利用酶的催化放大作用，能将微弱的信号放大，因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质（甚至达到皮克级 pg/mL）。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质，它也能“捕捉”到。

特异性强（瞄得准）：

基于抗原-抗体的特异性结合原理，试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应，很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率，结果准确可靠。

操作简便且快速：

相比于一些复杂的仪器分析方法，ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件，按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。

高通量与适用性广：

它通常采用96孔板或48孔板，一次实验可以同时处理几十个样本，非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外，它不仅能测蛋白，还能测抗体、激素、药物残留甚至农药，应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。

安全稳定：

不像放射免疫法那样使用放射性同位素，ELISA使用的是酶标记，对人体和环境无辐射危害，且试剂保存时间较长。