大鼠YY肽(PYY)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

1. 检测原理

本试剂盒采用竞争性ELISA法，特异性检测大鼠肽YY（PYY）的完整分子（PYY1-36）和活性形式（PYY3-36）。微孔板预包被抗PYY抗体，样本中的PYY与生物素标记的PYY竞争结合抗体，通过HRP-链霉亲和素系统催化TMB显色，信号强度与PYY浓度呈反比。

2. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件  特殊说明

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  抗PYY多克隆抗体包被

PYY标准品  0-1000 pg/mL  -20℃（冻干粉）  含大鼠PYY1-36和PYY3-36

生物素-PYY  120 μL  -20℃（避光）  竞争性检测探针

酶结合物  120 μL  -20℃  HRP-链霉亲和素复合物

血浆稳定剂  1 mL  -20℃  含蛋白酶抑制剂

TMB底物  10 mL  2-8℃（棕色瓶）  超敏配方

3. 关键技术参数

检测范围：10-1000 pg/mL

灵敏度：3.2 pg/mL（最低检测限）

样本类型：

首选：EDTA血浆（含稳定剂）

可选：回肠/结肠组织匀浆

交叉反应性：

100% PYY1-36和PYY3-36

<0.01% NPY、PP、PYY(13-36)

批内变异：≤6.5%

批间变异：≤9.8%

4. 样本处理规范

血浆采集：

使用预冷EDTA管（含10%体积稳定剂）

立即冰浴，4℃ 1500×g离心15分钟

分装后-80℃保存（避免冻融>2次）

组织处理：

取回肠末端1cm组织

按1:9（w/v）加入预冷提取液（1M乙酸含5% BSA）

沸水浴5分钟灭活酶

4℃ 12000×g离心20分钟

5. 实验操作流程

标准品复溶：

用标准品稀释液配制0、10、25、50、100、250、500、1000 pg/mL梯度

竞争反应：

每孔加入：50μL标准品/样本 + 50μL生物素-PYY

37℃振荡孵育2小时（300 rpm）

信号检测：

洗板5次（自动洗板机，350μL/孔）

加酶结合物100μL/孔，37℃30分钟

TMB显色（精确控制10±0.5分钟）

终止后5分钟内检测（450nm/630nm）

6. 重点应用方向

肥胖机制研究：PYY3-36的厌食作用评估

胃肠手术后：RYGB术后PYY分泌变化

肠道菌群研究：SCFAs对L细胞的调控

糖尿病研究：PYY与胰岛素分泌的关系

7. 关键注意事项

样本稳定性：

未加稳定剂的血浆：室温降解半衰期≈15分钟

添加稳定剂后：-80℃可保存6个月

干扰因素控制：

溶血样本需超速离心（10000×g，10分钟）

高脂样本建议1:2稀释

标准曲线特性：

典型IC50值：80-120 pg/mL

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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ELISA试剂盒的主要优点

ELISA之所以被广泛应用，主要归功于以下几个核心优势：

灵敏度高（抓得准）：

它利用酶的催化放大作用，能将微弱的信号放大，因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质（甚至达到皮克级 pg/mL）。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质，它也能“捕捉”到。

特异性强（瞄得准）：

基于抗原-抗体的特异性结合原理，试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应，很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率，结果准确可靠。

操作简便且快速：

相比于一些复杂的仪器分析方法，ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件，按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。

高通量与适用性广：

它通常采用96孔板或48孔板，一次实验可以同时处理几十个样本，非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外，它不仅能测蛋白，还能测抗体、激素、药物残留甚至农药，应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。

安全稳定：

不像放射免疫法那样使用放射性同位素，ELISA使用的是酶标记，对人体和环境无辐射危害，且试剂保存时间较长。