大鼠YY肽(PYY)elisa试剂盒

1. 检测原理

本试剂盒采用竞争性ELISA法，特异性检测大鼠肽YY（PYY）的完整分子（PYY1-36）和活性形式（PYY3-36）。微孔板预包被抗PYY抗体，样本中的PYY与生物素标记的PYY竞争结合抗体，通过HRP-链霉亲和素系统催化TMB显色，信号强度与PYY浓度呈反比。

 2. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件  特殊说明

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  抗PYY多克隆抗体包被

PYY标准品  0-1000 pg/mL  -20℃（冻干粉）  含大鼠PYY1-36和PYY3-36

生物素-PYY  120 μL  -20℃（避光）  竞争性检测探针

酶结合物  120 μL  -20℃  HRP-链霉亲和素复合物

血浆稳定剂  1 mL  -20℃  含蛋白酶抑制剂

TMB底物  10 mL  2-8℃（棕色瓶）  超敏配方

3. 关键技术参数

检测范围：10-1000 pg/mL

灵敏度：3.2 pg/mL（最低检测限）

样本类型：

首选：EDTA血浆（含稳定剂）

可选：回肠/结肠组织匀浆

交叉反应性：

100% PYY1-36和PYY3-36

<0.01% NPY、PP、PYY(13-36)

批内变异：≤6.5%

批间变异：≤9.8%

4. 样本处理规范

血浆采集：

使用预冷EDTA管（含10%体积稳定剂）

立即冰浴，4℃ 1500×g离心15分钟

分装后-80℃保存（避免冻融>2次）

组织处理：

取回肠末端1cm组织

按1:9（w/v）加入预冷提取液（1M乙酸含5% BSA）

沸水浴5分钟灭活酶

4℃ 12000×g离心20分钟

5. 实验操作流程

标准品复溶：

用标准品稀释液配制0、10、25、50、100、250、500、1000 pg/mL梯度

竞争反应：

每孔加入：50μL标准品/样本 + 50μL生物素-PYY

37℃振荡孵育2小时（300 rpm）

信号检测：

洗板5次（自动洗板机，350μL/孔）

加酶结合物100μL/孔，37℃30分钟

TMB显色（精确控制10±0.5分钟）

终止后5分钟内检测（450nm/630nm）

6. 重点应用方向

肥胖机制研究：PYY3-36的厌食作用评估

胃肠手术后：RYGB术后PYY分泌变化

肠道菌群研究：SCFAs对L细胞的调控

糖尿病研究：PYY与胰岛素分泌的关系

7. 关键注意事项

样本稳定性：

未加稳定剂的血浆：室温降解半衰期≈15分钟

添加稳定剂后：-80℃可保存6个月

干扰因素控制：

溶血样本需超速离心（10000×g，10分钟）

高脂样本建议1:2稀释

标准曲线特性：

典型IC50值：80-120 pg/mL

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