小鼠纤维蛋白原(FG)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被小鼠纤维蛋白原捕获抗体的微孔板中，依次加入标准品、待测样本和HRP标记的检测抗体，经过温育和彻底洗涤后，加入底物TMB显色。在过氧化物酶催化下，TMB转化为蓝色，再经酸终止反应变为黄色。颜色深浅与样本中纤维蛋白原浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板：已包被捕获抗体的96孔或48孔板。

标准品：已知浓度的纤维蛋白原标准品。

检测抗体-HRP：辣根过氧化物酶标记的检测抗体。

底物溶液：TMB底物液。

终止液：用于终止酶促反应的酸性溶液。

洗涤缓冲液：用于洗涤未结合成分。

样品稀释液：用于稀释待测样本。

其他：封板膜、说明书等。

样本处理

血清：全血室温放置2小时或4℃过夜，离心取上清。

血浆：使用EDTA或肝素抗凝，离心取上清。

组织匀浆：组织剪碎后，用预冷PBS匀浆，离心取上清。

细胞培养上清：离心去除细胞 debris，取上清检测。

操作步骤

准备：试剂盒平衡至室温，设置标准品孔和样本孔。

加样：加入标准品、样本和HRP标记的检测抗体。

温育：37℃水浴或恒温箱温育60分钟。

洗涤：吸干孔内液体，加入洗涤液，重复洗涤5次。

显色：加入底物液，避光孵育15分钟。

终止：加入终止液，终止反应。

测定：酶标仪450nm波长下测定OD值。

性能指标

检测范围：0.25g/L-8g/L。

灵敏度：最低检测浓度小于0.1g/L。

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。

注意事项

严格按照规定时间和温度进行温育。

洗板不正确可导致不准确结果。

避免试剂和样本的交叉污染。

使用前确保所有试剂达到室温。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：